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taocuihua

铜虫 (小有名气)

[交流] 测序结果有重叠峰

请教各位:普通的PCR,产物用纯化试剂盒纯化以后送去测序,测序公司回信说无信号,打电话过去问又说是重叠峰很严重,是什么意思啊?都有哪些因素可能造成这样的问题呢?懂的大虾进来帮帮忙吧!提前谢过啦!
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jasco

木虫 (正式写手)

pcr产物不纯导致的,
2楼2008-09-25 10:38:24
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yuyixst

木虫 (正式写手)

好像是DNA不纯
3楼2008-09-25 10:43:06
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yangym1123

木虫 (小有名气)

应该是PCR产物不纯吧!
4楼2008-09-25 13:08:57
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taocuihua

铜虫 (小有名气)

谢谢各位!
可是我的电泳检测结果显示条带单一,而且很窄,特异性也很好,并且拿纯化试剂盒纯化过啊~怎么还会不纯呢?那要注意些什么才可以啊?
5楼2008-09-25 15:02:31
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

按你这么说 那肯定是没有问题了 问题可能在测序公司 那些话只是托词
建议你:一 换个公司测
           二 把片段连到载体上测序 如pmd18-T
6楼2008-09-25 16:16:30
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hhaidong

木虫 (正式写手)

建议:pcr产物直接送去,让他们纯化
7楼2008-09-25 16:49:31
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xipha

木虫 (正式写手)

克隆下然后挑单菌落
8楼2008-09-25 17:10:39
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taocuihua

铜虫 (小有名气)

多谢各位啊!感激不尽!
听了大家的建议以后我打算先送样品让测序公司纯化试试,或者换换测序公司,不行的话再考虑克隆,因为我的师姐说我的实验没有必要克隆呢。
多谢啦哈!
9楼2008-09-25 17:51:03
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月月大可

木虫 (著名写手)

通过划线分离,挑取单菌落送公司测序
还不行就换家测序公司
10楼2008-09-25 18:30:31
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