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雪晴2013

金虫 (正式写手)

[求助] 原核pet28a表达的菌株诱导不出目的蛋白? 已有3人参与

表达np基因的部分片段,大概1100bp,克隆到pet28a上,在BL21中,IPTG1mm,37*,200r表达4h,然后取诱导、未诱导全菌直接跑的PAGE,看不出差异带,测序鉴定证明序列没有问题,为什么蛋白没有表达呢?
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wp田宇

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
29楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-28 22:25:33
没用过这个启动子,这个是色氨酸缺乏时才表达的么? 不是特别清楚,所以可能帮不了你呢。
但是 启动子后面紧跟目的基因的话,恐怕是不行的。
启动子启动RNA的转录,但蛋白质翻译的启动不仅仅依赖于ATG的读码,还 ...

嗯,,谢谢。是的这个启动子在无色氨酸或色氨酸类似物存在下才有启动作用。。谢谢
努力让自己做到金钱和修养的统一!!
31楼2015-12-28 22:35:17
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bhl2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
过夜菌 培养到对数期之后进行诱导的吗

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-12-24 16:15:33
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雪晴2013

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bhl2012 at 2015-12-24 16:15:33
过夜菌 培养到对数期之后进行诱导的吗

培养过夜后,1:100转种培养到对数生长期再诱导的
3楼2015-12-24 21:55:15
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你搞清楚!BL21不能表达PET,必须DE3的才可以,BL21 DE3 ,Rosetta DE3都行,用BL21鬼都出不来,根本没有T7启动子。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
4楼2015-12-25 03:07:28
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