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雪晴2013

金虫 (正式写手)

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专业: 免疫学

[求助] 原核pet28a表达的菌株诱导不出目的蛋白？已有3人参与

表达np基因的部分片段，大概1100bp，克隆到pet28a上，在BL21中，IPTG1mm，37*，200r表达4h，然后取诱导、未诱导全菌直接跑的PAGE，看不出差异带，测序鉴定证明序列没有问题，为什么蛋白没有表达呢？

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1楼 2015-12-24 16:05:07

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雪晴2013

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引用回帖:

11楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-25 16:24:11
看你最初的描述，我觉得很多不准确的地方，比如诱导4h，前面经过转接了么？转接前OD值是多少，转接后加IPTG时OD值是多少。
测序没问题，是指没突变还是从tag位置到前后读框都没问题，还是仅仅对了一下没有突变而已 ...

转接前没测OD，转接后OD值是0.6开始诱导的，测序后比对了氨基酸序列与酶切位点，都没问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]