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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)

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[求助] PCR引物M13 M4和M13 RV 的碱基序列

各位大侠
请教大家一个问题，我采用同样的一个样品（目的片段约为500bp），以M13 M4和M13 RV为引物，相同PCR条件去做菌液PCR，出现不同大小片段的基因片段，为什么？
详情如下：
1. 提取DNA，PCR扩增，未发现杂带，于是普通DNA纯化，并加A和连接，做菌液PCR，目的片段大小为750bp。
2.提取DNA，PCR扩增，发现杂带，于是切胶回收DNA纯化，并加A和连接，做菌液PCR，目的片段大小为500bp。
问题如下：
1. 不知道M13Z这对引物的碱基数目有多少？
2. 两次差别这么大是为什么？跟纯化过程有直接关系吗？
3. 另外，电泳的电压对PCR的结果会产生影响吗？我这两次的电压有些差别

谢谢

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1楼 2015-12-21 15:32:59

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