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bjpkpd

铁虫 (初入文坛)

[求助] 新人求问 LC-MS 回收率 已有3人参与

本人刚开始做药物分析实验,用的是质谱是AB Sciex API 4000 QTRAP,串联岛津的液相。对血浆样本的处理如下:40μL的血浆,加20μL的药物溶液(乙腈溶解),20μL内标(乙腈溶解),涡旋,10000r/min离心10min,取上清。再重复两次,以充分沉淀蛋白。溶剂操作同血浆类似,只是把40μL的血浆换为乙腈。药物定量选用了两个离子对,发现药物的回收率只有百分之十左右,内标百分之三十多。另,之前还做过乙酸乙酯萃取,氮气吹干再复溶,回收率90%,应该不是血浆蛋白结合率过高。求问下大概原因是什么,不胜感激!
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paubin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
bjpkpd: 金币+2, 有帮助 2015-12-24 10:31:56
为什么要用蛋白沉淀?开发的方法是液萃吧

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-19 22:07:40
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bjpkpd

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by paubin at 2015-12-19 22:07:40
为什么要用蛋白沉淀?开发的方法是液萃吧

液质常用的样品前处理方法 不是就三种吗?沉淀蛋白,或者萃取,或者固相萃取。
3楼2015-12-20 10:26:27
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paubin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你蛋白沉不出来,就用液萃做回收率呗。

发自小木虫Android客户端
4楼2015-12-20 15:52:35
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清凉__小吊带

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

沉淀蛋白法不是还要加沉淀剂么?
5楼2016-01-08 16:45:22
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459465556

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

蛋白沉淀法需要至少加三到四倍血浆体积的沉淀剂,否则蛋白沉淀不下去
世事无常
6楼2016-02-29 21:22:06
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paubin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

乙腈蛋白沉淀的比例,最少是血浆一份,乙腈三份。
甲醇蛋白沉淀的比例,最少是血浆一份,甲醇5份。

血浆和乙腈的比例1:1,蛋白沉淀不完全。

还要考虑基质效应的影响。
7楼2018-06-05 00:16:14
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