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banana499

新虫 (初入文坛)

[求助] 问个关于大肠杆菌培养的问题 已有2人参与

我是养菌菜鸟,先请教下,
1.一般-80度取出的大肠杆菌菌种(top10)复苏需要12-16小时,中间可以中断吗?比如培养2小时取出常温放个5小时再继续培养?中断会造成什么结果。中断是否用比较合适的方法,有时候时间安排不好,第二天来又怕时间太长了。

2.我是做定向突变的,大肠杆菌,然后用氯化钙处理后,制备感受态细胞,在加入需要导入的质粒,请问最后一部用氯化钙处理以后在4度放几个小时比较合适,转化效率最高?另外制备好的感受态细胞听说可以直接保存,下次不用再次用氯化钙处理?请问如何保存,下次使用直接复苏就可以了吗?还是有严格的操作流程?
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
banana499: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-17 14:42:21
1.中断一般没事,为啥要中断了,12到16个小时,那你晚上8点接,第二天8点收不好么。
2.感受态制备及保存的事情请看《分子克隆手册》或者《分子克隆实验指南》上面很详细的。祝顺利
2楼2015-12-17 09:40:23
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jasany

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
中断本身没什么事,就是怕移来移去,感染杂菌
失败的唯一原因是专注被打破了
3楼2015-12-17 10:56:56
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banana499

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-12-17 09:40:23
1.中断一般没事,为啥要中断了,12到16个小时,那你晚上8点接,第二天8点收不好么。
2.感受态制备及保存的事情请看《分子克隆手册》或者《分子克隆实验指南》上面很详细的。祝顺利

主要是,放进去的时候忘记计算时间了。。。。摇了一小时才发现太早了,于是拿到室放了几个小时离开实验室在放进摇床
4楼2015-12-17 14:43:24
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二在奔三路上

新虫 (初入文坛)

如果是多级发酵的话,可以不用复苏
5楼2015-12-29 09:41:05
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