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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 问个关于大肠杆菌培养的问题
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banana499

新虫 (初入文坛)

[求助] 问个关于大肠杆菌培养的问题 已有2人参与

我是养菌菜鸟，先请教下，
1.一般-80度取出的大肠杆菌菌种（top10）复苏需要12-16小时，中间可以中断吗？比如培养2小时取出常温放个5小时再继续培养？中断会造成什么结果。中断是否用比较合适的方法，有时候时间安排不好，第二天来又怕时间太长了。

2.我是做定向突变的，大肠杆菌，然后用氯化钙处理后，制备感受态细胞，在加入需要导入的质粒，请问最后一部用氯化钙处理以后在4度放几个小时比较合适，转化效率最高？另外制备好的感受态细胞听说可以直接保存，下次不用再次用氯化钙处理？请问如何保存，下次使用直接复苏就可以了吗？还是有严格的操作流程？
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1楼 2015-12-16 14:36:21
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
banana499: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-17 14:42:21
1.中断一般没事，为啥要中断了，12到16个小时，那你晚上8点接，第二天8点收不好么。
2.感受态制备及保存的事情请看《分子克隆手册》或者《分子克隆实验指南》上面很详细的。祝顺利
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2015-12-17 09:40:23
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jasany

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
中断本身没什么事，就是怕移来移去，感染杂菌
赞一下(1人) 回复此楼
失败的唯一原因是专注被打破了
3楼2015-12-17 10:56:56
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banana499

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-12-17 09:40:23
1.中断一般没事，为啥要中断了，12到16个小时，那你晚上8点接，第二天8点收不好么。
2.感受态制备及保存的事情请看《分子克隆手册》或者《分子克隆实验指南》上面很详细的。祝顺利

主要是，放进去的时候忘记计算时间了。。。。摇了一小时才发现太早了，于是拿到室放了几个小时离开实验室在放进摇床
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4楼2015-12-17 14:43:24
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二在奔三路上

新虫 (初入文坛)
如果是多级发酵的话，可以不用复苏
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5楼2015-12-29 09:41:05
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