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硫酸盐还原菌dsrAB基因的real time PCR的问题
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问题1. 溶解曲线出现很多杂峰，分别出现在主峰的前面和后面，这个是什么原因造成的呢？杂峰个自又代表什么东西呢？如图2，3. 问题2. 样品的溶解曲线虽然和标准品的溶解曲线的峰稍有偏离但是位置大致相同，这可以认为是同一物质吗？有的样品的溶解曲线与标准品的溶解曲线峰的位置虽然相同，但是比标准品的峰要宽，这个也可以认为是同一物质吗？如图4，5，6 问题3. 标准品1*10^9的扩增曲线和1*10^8以及1*10^7的扩增曲线在进入平台期后没有达到同一高度，这是什么原因造成的呢？或者说明了什么呢？如图1，7 我的pcr的条件是95℃ 30s；95℃ 15s，62℃ 30s，72℃ 30s，45cycles；95℃ 15s，60℃ 30s，95℃ 15s。 希望可以减少杂峰的产生，出单一峰，pcr的条件改需要如何改进呢？求各位专业人士的帮助，谢谢大家呢。 |
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