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bbsoslolita

银虫 (小有名气)

[求助] 还原响应载药胶束体外释放实验总是失败-释放率很低。 已有2人参与

大家好,最近我一直在做还原响应的载药胶束的体外缓释实验,但是结果都很不好,在还原性条件下的和不在还原性条件下的、具有还原响应性和不具还原响应性的胶束的释放率都差不多,而且DTT做的释放率很低,48h还不到10%。
我的实验方法:
4mL 1mg/mL的载药胶束溶液装入透析袋,透析袋外面加46mL PBS7.4透析液,DTT作为还原剂,浓度为0,或者是10mM。
实验在37摄氏度下进行,透析袋方面放置了搅拌子搅拌,每隔一段时间取样,补充透析液。样品测试UV,绘制成缓释曲线。
我不知道是不是由以下原因引起的:
1. 胶束溶液浓度太高,导致DOX释放不出来,或者是扩散地很慢。我看文献上有跟我差不多的,1mg/mL,也有很低的,0.025mg/mL。我是用UV测DOX释放量的,在1mg/mL的浓度下UV的测试已经捉襟见肘了,如果要在极低浓度下进行,恐怕要用荧光光谱仪来测试。
2. 没有使用摇床,因为没有条件,所以改成了透析袋外搅拌子搅拌,我的胶束是由两亲性的聚合物构成的,疏水端由二硫键交联。打开交联后,亲疏水聚合物可能还是组成胶束,没有解离,再加上没有摇床震荡,所以药物出来很慢。
3. 还原剂的问题。最初使用的是GSH来还原,但是发现透析液中会出现白色絮状的沉淀,可能是GSH在37摄氏度下会变质,这沉淀影响了紫外吸收,抬高了基线,使得释放率超出了理论值。后来我改成了DTT,发现DTT做出来的释放率很低,48h不到10%,还没有GSH做出来的高(48h 30%左右,但没有排除沉淀吸收的影响),就算是没有加DTT的都有4%,难道是DTT变质了?
问题比较麻烦,请了解的虫友和前辈多多指点,感激不尽。
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qwe0907123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by bbsoslolita at 2016-01-12 15:39:20
一方面是跟实验室条件结合,体积相加50mL刚好可以没过放在50mL烧杯中的透析袋并让透析夹固定不动。
一方面是参考文献中两者的体积,透析袋外面的透析液足够多以满足漏槽效应,还要考虑透析袋内的胶束含量使得以后 ...

蟹蟹!

发自小木虫Android客户端
9楼2016-01-13 09:23:45
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查看全部 17 个回答

lx815744820

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.建议用GSH,因为你要和制剂在体内的环境相对应,而且你用GSH的效果不错,那个沉淀没有包含红色的药物就没有问题。
2.DTT的量会不会加少了?
Whereisawill,thereisaway!
4楼2016-01-08 09:13:18
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bbsoslolita

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lx815744820 at 2016-01-08 09:13:18
1.建议用GSH,因为你要和制剂在体内的环境相对应,而且你用GSH的效果不错,那个沉淀没有包含红色的药物就没有问题。
2.DTT的量会不会加少了?

啊,谢谢你了,我现在是用GSH在做,然后导致问题的原因现在锁定在双键和GSH发生反应所导致。
5楼2016-01-08 15:57:17
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qwe0907123

木虫 (正式写手)

你好,你的4ml的胶束溶液和46ml的PBS缓冲液,这两个体积是怎么确定的?
7楼2016-01-11 21:36:58
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