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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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crab1983

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
8楼: Originally posted by yvonne9044 at 2015-12-15 22:31:12
有转录组就不用做race了吧?我就用转录组数据设计的引物

请问您是怎么做的。我这个基因克隆出来就只是转到拟南芥中,做个鉴定,需要他能在拟南芥中表达就行了。
11楼2016-02-23 10:32:55
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yvonne9044

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

咱俩差不多,你想问的是哪一部分怎么做?

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12楼2016-02-23 12:00:47
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yvonne9044

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
11楼: Originally posted by crab1983 at 2016-02-23 10:32:55
请问您是怎么做的。我这个基因克隆出来就只是转到拟南芥中,做个鉴定,需要他能在拟南芥中表达就行了。...

咱俩做的差不多,你问哪一部分怎么做

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13楼2016-02-23 12:01:09
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crab1983

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
13楼: Originally posted by yvonne9044 at 2016-02-23 12:01:09
咱俩做的差不多,你问哪一部分怎么做
...

我这个课题刚下来,现在我们组的人给我提供了我要克隆的基因的,转录组的数据,就是这个基因的cDNA序列。所以我现在就是要设计引物。
14楼2016-02-24 08:41:56
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yvonne9044

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
14楼: Originally posted by crab1983 at 2016-02-24 08:41:56
我这个课题刚下来,现在我们组的人给我提供了我要克隆的基因的,转录组的数据,就是这个基因的cDNA序列。所以我现在就是要设计引物。...

那就没啥了,在读码框外侧设计引物就可以了,不难,应该一次就能成

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15楼2016-02-24 10:32:26
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crab1983

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2015-12-15 11:48:44
先用你的序列做blastx,看是否含有完整ORF,看编码区的具体位置,然后再根据你的需要设计引物,做定量的话,不需要有完整ORF,但是如果做表达研究功能,那需要有完整ORF,如没有,就做RACE扩全长。

用blastx怎么能看出我的序列是不是完整的ORF呀。
16楼2016-03-11 15:18:01
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stone2239

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by crab1983 at 2016-03-11 15:18:01
用blastx怎么能看出我的序列是不是完整的ORF呀。...

看你cDNA序列比对区域和匹配上的蛋白序列比对区域,举个例子,你的cDNA长度是1100bp,比对上的区域是100-1000bp,与数据库里某全长为300aa的蛋白的1-300匹配上了,那说明你的序列是包括完整的ORF。如果与数据库里某全长为400aa的蛋白的100-400aa匹配上了,那说明你的序列ORF缺少5'端。
17楼2016-03-11 21:06:39
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小李子冲奥

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

请问楼主做出来了么?
18楼2016-04-13 10:55:42
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yuguiyan

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2015-12-15 11:48:44
先用你的序列做blastx,看是否含有完整ORF,看编码区的具体位置,然后再根据你的需要设计引物,做定量的话,不需要有完整ORF,但是如果做表达研究功能,那需要有完整ORF,如没有,就做RACE扩全长。

求指教RACE 引物设计
19楼2016-05-13 00:27:56
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jackyoung

超级版主

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引用回帖:
10楼: Originally posted by crab1983 at 2016-02-23 10:25:15
我这个基因是植物光合作用过程中的酶,理论上转到拟南芥中应该能提高拟南芥的光合速率。...

那你首先需要编码区预测,然后再克隆CDS.

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CestLaVie
20楼2016-05-13 09:12:48
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