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shaka2001金虫 (正式写手)
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western blot 转印不充分
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我做66KD的蛋白，sds-page电泳用4%浓缩胶，10%分离胶，分离效果不错； 转印缓冲液：Tris-base 3.03 g，甘氨酸 14.4 g，甲醇200ml，蒸馏水定容至1000ml； 转印条件：湿转，恒压100V，60min（曾经用过100V，120min，结果一样）； 转印完毕后，用丽春红给纤维素膜染色，考马斯亮蓝给胶染色，结果marker全部转印到纤维素膜上了 ，而蛋白有不少还在胶上（看染色情况，估计得剩一半）。 各位高人，我这是怎么回事啊？ 另外， 1. 我在转印以前用转印缓冲液浸泡过硝酸纤维素膜，海绵30min，滤纸，胶15min。是不是与此有关，因为有帖子说胶是不应在转印液中浸泡的。 2. 转印液中是否要加SDS，有资料说湿转法为了增加转印效率可在缓冲液中加0.1%SDS。 |
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