| 查看: 890 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
shaka2001金虫 (正式写手)
|
[交流]
western blot 转印不充分
|
||
|
我做66KD的蛋白，sds-page电泳用4%浓缩胶，10%分离胶，分离效果不错； 转印缓冲液：Tris-base 3.03 g，甘氨酸 14.4 g，甲醇200ml，蒸馏水定容至1000ml； 转印条件：湿转，恒压100V，60min（曾经用过100V，120min，结果一样）； 转印完毕后，用丽春红给纤维素膜染色，考马斯亮蓝给胶染色，结果marker全部转印到纤维素膜上了 ，而蛋白有不少还在胶上（看染色情况，估计得剩一半）。 各位高人，我这是怎么回事啊？ 另外， 1. 我在转印以前用转印缓冲液浸泡过硝酸纤维素膜，海绵30min，滤纸，胶15min。是不是与此有关，因为有帖子说胶是不应在转印液中浸泡的。 2. 转印液中是否要加SDS，有资料说湿转法为了增加转印效率可在缓冲液中加0.1%SDS。 |
回复此楼» 猜你喜欢
288求调剂，一志愿华南理工大学071005
已经有18人回复
-
086003调剂求助
已经有22人回复
-
293求调剂
已经有8人回复
-
290求调剂
已经有10人回复
-
计算机22408 281分，求调剂
已经有5人回复
-
284求调剂
已经有12人回复
-
211本科材料化工求调剂
已经有12人回复
-
电子信息279求调剂，有书读就行
已经有11人回复
-
材料与化工300求调剂
已经有40人回复
-
290调剂生物0860
已经有19人回复
shaka2001
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2029.6
- 散金: 10
- 帖子: 352
- 在线: 11.5小时
- 虫号: 243288
- 注册: 2006-04-15
- 性别: GG
- 专业: 心理学
2楼2008-09-22 22:52:33
castle9987
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 349.2
- 红花: 1
- 帖子: 73
- 在线: 15.2小时
- 虫号: 618249
- 注册: 2008-10-06
- 专业: 兽医药理学与毒理学
3楼2008-12-28 23:07:55
sutao1979
木虫 (著名写手)
小木虫10年groupleader
- BioEPI: 1
- 应助: 5 (幼儿园)
- 贵宾: 0.694
- 金币: 3553.3
- 散金: 150
- 红花: 3
- 帖子: 1479
- 在线: 64小时
- 虫号: 79951
- 注册: 2005-07-12
- 性别: GG
- 专业: 植物分类学
4楼2008-12-28 23:25:26
