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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 本人第一次设计引物，结果溶解曲线是这个样子的。
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insieam

新虫 (初入文坛)

[求助] 本人第一次设计引物，结果溶解曲线是这个样子的。 已有1人参与

本人第一次设计引物，跑完qPCR后，溶解曲线是这个样子的，请教各位大侠，这是怎么回事啊？

本人第一次设计引物，结果溶解曲线是这个样子的。
IMG_1476.JPG
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1楼 2015-12-11 15:58:53
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同志你倒着发照片看起来好痛苦。。。这是同一对引物还是好几对引物啊？不过总的来说没有明显的双峰似乎还行
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2楼2015-12-11 20:59:09
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insieam

新虫 (初入文坛)
谢谢！我传的时候是正的，不知后来怎么变反了，是单峰，但下降支怎么是这个样子啊？

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3楼2015-12-12 10:18:37
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草溪河

铁虫 (著名写手)
做溶解的时候感觉上限温度设得不高。产物溶解温度90度，扩的片段请问是多大的呀？

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4楼2015-12-12 13:33:47
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insieam

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-12 13:33:47
做溶解的时候感觉上限温度设得不高。产物溶解温度90度，扩的片段请问是多大的呀？

你好！我扩增的片段是80bp，溶解曲线的温度是95℃ 15s、60℃ 30s、95℃ 15s。
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5楼2015-12-12 15:22:35
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1550890759

木虫 (小有名气)
cycle多少?

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纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行。
6楼2015-12-13 18:11:50
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insieam

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1550890759 at 2015-12-13 18:11:50
cycle多少?

40个循环

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7楼2015-12-13 19:37:17
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1550890759

木虫 (小有名气)
把RNA浓度弄高点 再反转录 浓度太低了

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纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行。
8楼2015-12-13 20:28:35
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insieam

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 1550890759 at 2015-12-13 20:28:35
把RNA浓度弄高点 再反转录 浓度太低了

RNA浓度低会影响溶解曲线吗？我的内参的溶解曲线都是好的，而且内参的CT值在15左右。
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9楼2015-12-14 11:17:02
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