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insieam

新虫 (初入文坛)

[求助] 本人第一次设计引物,结果溶解曲线是这个样子的。 已有1人参与

本人第一次设计引物,跑完qPCR后,溶解曲线是这个样子的,请教各位大侠,这是怎么回事啊?

本人第一次设计引物,结果溶解曲线是这个样子的。
IMG_1476.JPG
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同志你倒着发照片看起来好痛苦。。。这是同一对引物还是好几对引物啊?不过总的来说没有明显的双峰似乎还行
2楼2015-12-11 20:59:09
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insieam

新虫 (初入文坛)

谢谢!我传的时候是正的,不知后来怎么变反了,是单峰,但下降支怎么是这个样子啊?

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-12-12 10:18:37
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草溪河

铁虫 (著名写手)

做溶解的时候感觉上限温度设得不高。产物溶解温度90度,扩的片段请问是多大的呀?

发自小木虫Android客户端
4楼2015-12-12 13:33:47
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insieam

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-12 13:33:47
做溶解的时候感觉上限温度设得不高。产物溶解温度90度,扩的片段请问是多大的呀?

你好!我扩增的片段是80bp,溶解曲线的温度是95℃ 15s、60℃ 30s、95℃ 15s。
5楼2015-12-12 15:22:35
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1550890759

木虫 (小有名气)

纸上得来终觉浅,绝知此事要躬行。
6楼2015-12-13 18:11:50
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insieam

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 1550890759 at 2015-12-13 18:11:50
cycle多少?

40个循环

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-12-13 19:37:17
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1550890759

木虫 (小有名气)

把RNA浓度弄高点 再反转录 浓度太低了

发自小木虫Android客户端
纸上得来终觉浅,绝知此事要躬行。
8楼2015-12-13 20:28:35
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insieam

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 1550890759 at 2015-12-13 20:28:35
把RNA浓度弄高点 再反转录 浓度太低了

RNA浓度低会影响溶解曲线吗?我的内参的溶解曲线都是好的,而且内参的CT值在15左右。
9楼2015-12-14 11:17:02
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