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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助真核基因N端信号肽的去除
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助真核基因N端信号肽的去除

我看到文献上讲真核基因N端的信号肽是影响其在原核中表达的首要因素，因此要在克隆之前就从真核基因中设计引物，去除信号肽序列。
可我要克隆的基因如果去除信号肽序列，那么其N端就不是甲硫氨酸的密码子了，那么如果构建进表达载体的话其大肠杆菌的转录起始系统怎么能够识别呢？
请高手指点！
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1楼 2008-09-22 00:21:38
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zyk_527

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xuehu2008 at 2008-9-22 13:27:
哦，如果是这样的话，目标蛋白的N端和C端岂不是都带了几个附加的氨基酸，会影响其生物学功能吗？

N端可以在MET和你所要的序列之间添加蛋白酶切位点，如EK酶的，这样后期可以将met切掉，C端你自己加上终止密码子怎么会多出来氨基酸呢
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6楼2008-09-23 12:24:44
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boouy

银虫 (正式写手)
大肠杆菌表达系统中有Met啊，都是融和表达系统，因此ORF要In Frame。
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2楼2008-09-22 10:34:56
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)
哦，如果是这样的话，目标蛋白的N端和C端岂不是都带了几个附加的氨基酸，会影响其生物学功能吗？
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3楼2008-09-22 13:27:03
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boouy

银虫 (正式写手)
大家都这么做，也许有影响，姑且不考虑吧。
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4楼2008-09-23 08:17:00
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