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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于小目的片段酶切后纯化的问题
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7961243

金虫 (正式写手)

[交流] 关于小目的片段酶切后纯化的问题

胶回收了三次都没回收到目的片段-----
我的目的片段只有90bp.酶切后去掉几个保护性碱基剩下也就八十几个bp,每次电泳纯化后胶回收总是看不到带，全丢失掉了，可能是片段太小。请问，除电泳外有什么方法去除酶切后多余的酶来纯化目的片段？谢谢。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:11 ]
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1楼 2008-09-21 19:46:26
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biocore

溶胶，然后加同等体积异丙醇，过柱。
洗涤液，也加同等体积异丙醇。
回收。
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2楼2008-09-21 21:39:22
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
你如果带比较单一可一试一试 片段纯化试剂盒 不用切胶 直接回收 去除酶残留
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3楼2008-09-22 09:55:26
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sumertansy

铜虫 (小有名气)
你是PCR产物酶切，可以反应体系直接回收，不用胶回收。
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4楼2008-09-25 21:54:16
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GinTonic

金虫 (小有名气)
直接酚氯仿抽提异丙醇沉淀吧
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5楼2008-09-26 14:38:07
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meizihan

新虫 (初入文坛)

换个试剂盒

换个试剂盒试试。
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6楼2008-09-26 16:27:20
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白利利

铜虫 (小有名气)
加入总浓度20%的异丙醇
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天道酬勤
7楼2009-05-04 19:36:23
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xiaoli12

木虫 (正式写手)
，
1，直接六十度灭活酶（每种酶的灭活温度不同）进行连接。
2，一般胶回收试剂盒，溶解上柱后，离心速递降到4000以下。其他各部相同。
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8楼2009-05-04 19:53:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
买专门的试剂盒，要不就先用灭活的方法把酶灭了然后沉淀，也有一些核酸共沉淀剂的，沉淀率高一点
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9楼2009-05-04 20:03:22
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