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7961243

金虫 (正式写手)

[交流] 关于小目的片段酶切后纯化的问题

胶回收了三次都没回收到目的片段-----
我的目的片段只有90bp.酶切后去掉几个保护性碱基剩下也就八十几个bp,每次电泳纯化后胶回收总是看不到带,全丢失掉了,可能是片段太小。请问,除电泳外有什么方法去除酶切后多余的酶来纯化目的片段?谢谢。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:11 ]
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biocore

溶胶,然后加同等体积异丙醇,过柱。
洗涤液,也加同等体积异丙醇。
回收。
2楼2008-09-21 21:39:22
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

你如果带比较单一可一试一试 片段纯化试剂盒 不用切胶 直接回收 去除酶残留
3楼2008-09-22 09:55:26
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sumertansy

铜虫 (小有名气)

你是PCR产物酶切,可以反应体系直接回收,不用胶回收。
4楼2008-09-25 21:54:16
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GinTonic

金虫 (小有名气)

直接酚氯仿抽提异丙醇沉淀吧
5楼2008-09-26 14:38:07
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meizihan

新虫 (初入文坛)

换个试剂盒

换个试剂盒试试。
6楼2008-09-26 16:27:20
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白利利

铜虫 (小有名气)

加入总浓度20%的异丙醇
天道酬勤
7楼2009-05-04 19:36:23
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xiaoli12

木虫 (正式写手)


1,直接六十度灭活酶(每种酶的灭活温度不同)进行连接。
2,一般胶回收试剂盒,溶解上柱后,离心速递降到4000以下。其他各部相同。
8楼2009-05-04 19:53:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

买专门的试剂盒,要不就先用灭活的方法把酶灭了然后沉淀,也有一些核酸共沉淀剂的,沉淀率高一点
9楼2009-05-04 20:03:22
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