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z631535213木虫 (正式写手)
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请教dNTP方面的一点问题。。。已有1人参与
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楼前段时间自己配制了PCR体系实验，结果有些问题想请教下各位 主要是研究PCR MIX的成分， 大的方面分了两个：一个是自配的PCR Buffer，一个是自配的dNTP(U /A/C/G) 但是通过反复的实验，发现自配的PCR Buffer是没问题的，但是dNTP(U /A/C/G）不行 楼的dNTP(U /A/C/G)里面是 买来的dUTP/dATP/dCTP/dGTP分别为100mM，用蒸馏水稀释为：dUTP 20mM,dATP/dCTP/dGTP均为10mM。最后U/A/C/G各取一分混匀配成d了dUTP 5mM，dATP/dCTP/dGTP均为2.5mM的dNTP(U /A/C/G) 现在考虑可能有两个问题： 1.要么是dUTP浓度不对 2.要么是对dUTP/dATP/dCTP/dGTP 100mM稀释的时候用的蒸馏水不行，因为刚上网查好像得用中性或pH 7.5作用的蒸馏水稀释。 请各位帮忙指教一下 3.如果说是要用中性或pH 7.5作用的蒸馏水稀释，是用什么碱调蒸馏水pH，因为我有看到说用NaOH调节，也有看到说用Tris调节。 |
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z631535213
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3楼2015-12-11 11:42:05