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王怡青

新虫 (初入文坛)

[交流] 3race 已有4人参与

我是用自己合成引物的方法，照着Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书做的RACE,现在5’RACE做出来了，就是3‘race一直没有条带，有没有哪位大神的3’RACE做成功了，是否能够提供些经验？

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1楼 2015-12-06 18:26:04
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王怡青

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-12-07 19:47:06
如果是按照Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书做的RACE的话，应该是很好出来的，就按照说明书的方法反转模板，然后PCR 第一次基本会没有条带，第二次槽式PCR基本就会出来条带了。能不能告诉我下5’UTR着么 ...

为什么说明书上3race要用upm长短接头的mix去做？3端的引物设计是和cDna上游一样的吗？

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7楼2015-12-07 20:31:35
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王怡青

新虫 (初入文坛)
我们没有去买试剂盒，所以东西都是自己配的，3‘race部分没有按照试剂盒说明书上的做，因为发现拿UPM和3’GSP扩出来的条带测序后完全是没有信号，或者只有一部分看不懂的参考序列，所以我们导师设计了一个和3‘接头互补的引物与3’GSP一起扩，但是一直没有条带，现在真的是好捉急啊

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2楼2015-12-06 18:27:13
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王怡青

新虫 (初入文坛)
难道就沉了吗？
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3楼2015-12-07 11:27:07
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qaz139687

新虫 (小有名气)
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请问一下，着么判断5‘race是否全了呀 就是5-UTR是否拿全了？
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4楼2015-12-07 19:44:07
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qaz139687

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是按照Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书做的RACE的话，应该是很好出来的，就按照说明书的方法反转模板，然后PCR 第一次基本会没有条带，第二次槽式PCR基本就会出来条带了。能不能告诉我下5’UTR着么判断是否全了，拿这个试剂盒克隆了好几个基因的序列，5‘RACE结果已经看到试剂盒带的上游引物，ORF框也是全的 就是不知道5-UTR是不是全的。。
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5楼2015-12-07 19:47:06
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王怡青

新虫 (初入文坛)
我也是小白，5race出来后和你的一样也能找到上游引物，导师帮我看了说是全的，我以为我的就是全了，难道不全吗？

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6楼2015-12-07 20:28:20
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qaz139687

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 王怡青 at 2015-12-07 20:28:20
我也是小白，5race出来后和你的一样也能找到上游引物，导师帮我看了说是全的，我以为我的就是全了，难道不全吗？

不知道哦 你没问导师着么判断5-UTR是否全了吗  我导师都不会这方面的哈哈
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8楼2015-12-08 10:34:15
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 王怡青 at 2015-12-07 20:31:35
为什么说明书上3race要用upm长短接头的mix去做？3端的引物设计是和cDna上游一样的吗？
...

RACE引物设计原则都是一样的 只不过3‘RACE的引物是自己设计上游引物，5’RACE的是自己设计下游引物
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9楼2015-12-08 10:35:35
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dushangyun

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-12-07 19:47:06
如果是按照Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书做的RACE的话，应该是很好出来的，就按照说明书的方法反转模板，然后PCR 第一次基本会没有条带，第二次槽式PCR基本就会出来条带了。能不能告诉我下5’UTR着么 ...

最近一直在做，也不知道怎么判断5端是否完整
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经不住逝水流年，逃不过此间少年
10楼2015-12-08 10:41:06
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