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王怡青

新虫 (初入文坛)

[交流] 3race 已有4人参与

我是用自己合成引物的方法，照着Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书做的RACE,现在5’RACE做出来了，就是3‘race一直没有条带，有没有哪位大神的3’RACE做成功了，是否能够提供些经验？

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1楼 2015-12-06 18:26:04
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qaz139687

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引用回帖:
11楼: Originally posted by 王怡青 at 2015-12-08 11:44:39
如果3‘端是上游引物，为什么Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书的UPM和3’接头序列是一样的？...

就是一样的 只不过一个加在5’端  1个加在3’末端，所以2次用的模板是不一样的
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15楼2015-12-08 18:56:49
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王怡青

新虫 (初入文坛)
我们没有去买试剂盒，所以东西都是自己配的，3‘race部分没有按照试剂盒说明书上的做，因为发现拿UPM和3’GSP扩出来的条带测序后完全是没有信号，或者只有一部分看不懂的参考序列，所以我们导师设计了一个和3‘接头互补的引物与3’GSP一起扩，但是一直没有条带，现在真的是好捉急啊

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2楼2015-12-06 18:27:13
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qaz139687

新虫 (小有名气)
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请问一下，着么判断5‘race是否全了呀 就是5-UTR是否拿全了？
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4楼2015-12-07 19:44:07
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qaz139687

新虫 (小有名气)
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如果是按照Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书做的RACE的话，应该是很好出来的，就按照说明书的方法反转模板，然后PCR 第一次基本会没有条带，第二次槽式PCR基本就会出来条带了。能不能告诉我下5’UTR着么判断是否全了，拿这个试剂盒克隆了好几个基因的序列，5‘RACE结果已经看到试剂盒带的上游引物，ORF框也是全的 就是不知道5-UTR是不是全的。。
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5楼2015-12-07 19:47:06
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