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王怡青
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3race
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我是用自己合成引物的方法,照着Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书做的RACE,现在5’RACE做出来了,就是3‘race一直没有条带,有没有哪位大神的3’RACE做成功了,是否能够提供些经验?
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1楼
2015-12-06 18:26:04
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楼主加油
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我是一只小小小小乌龟,爬啊爬啊爬啊爬、、、、、
12楼
2015-12-08 12:42:36
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王怡青
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我们没有去买试剂盒,所以东西都是自己配的,3‘race部分没有按照试剂盒说明书上的做,因为发现拿UPM和3’GSP扩出来的条带测序后完全是没有信号,或者只有一部分看不懂的参考序列,所以我们导师设计了一个和3‘接头互补的引物与3’GSP一起扩,但是一直没有条带,现在真的是好捉急啊
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2楼
2015-12-06 18:27:13
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请问一下,着么判断5‘race是否全了呀 就是5-UTR是否拿全了?
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4楼
2015-12-07 19:44:07
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qaz139687
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如果是按照Clontech 的SMARTer RACE 试剂盒说明书做的RACE的话,应该是很好出来的,就按照说明书的方法反转模板,然后PCR 第一次基本会没有条带,第二次槽式PCR基本就会出来条带了。
能不能告诉我下5’UTR着么判断是否全了,拿这个试剂盒克隆了好几个基因的序列,5‘RACE结果已经看到试剂盒带的上游引物,ORF框也是全的 就是不知道5-UTR是不是全的。。
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5楼
2015-12-07 19:47:06
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