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mofashishe铜虫 (小有名气)
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[交流]
5' RACE 的问题。。。
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使用 clonetech的BD SMART 试剂盒扩几个线虫基因的5‘序列。 但是测序回来的结果都是NUP的单引物扩增。 反转录的时候用的是PrimeScript Reverse Transcriptase (RNase H-)。 体系： RNA：3ul SMART oligoII：1ul 5’ CDS primer：1ul buffer：2ul DTT（100mM）：0.25ul dNTP（10mM）：1ul RTase：0.5ul DEPC 水 to 10ul。 方法都是按照说明书所叙70度变性，再冰浴的，再42度反应1小时。 在做第一、二轮PCR时都做了退火温度从62度-70度的梯度，但是测序回来4个基因的结果都是NUP的单引物扩增。 请各位指教指教。。。。。 [ Last edited by mofashishe on 2008-9-20 at 10:38 ] |
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