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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 帮忙分析PCR失败原因
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xtmgah31

银虫 (小有名气)

[交流] 帮忙分析PCR失败原因

我用touch-down PCR方法扩增混合菌的V3区，跑电泳出来一片模糊，marker也是，都是弥散的条带，这是什么原因呢，请高手帮忙指点
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1楼 2008-09-19 21:57:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
那就是胶的问题
一般是buffer变质了
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2楼2008-09-19 22:11:32
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江枫渔火

铜虫 (小有名气)
1.如果有杂带的话可考虑提高PCR的退火温度
2.胶的浓度是否合适
3.缓冲液是否用久了，新配缓冲液试试
4.电泳电压是否太高，电压高了缓冲液温度会升高使DNA破坏掉
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3楼2008-09-20 00:04:23
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running8853

金虫 (正式写手)
应该是胶的问题  我也遇到过
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4楼2008-09-23 23:34:13
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xiaomuchong872

金虫 (小有名气)
marker都是弥散的条带的话
肯定找胶的原因啊
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放弃破罐子破摔
5楼2008-09-28 20:21:13
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