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winnie516

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于启动子克隆

我要做的实验是根据已知报道的启动子序列,设计引物,再从另一种植物的基因组DNA中克隆出启动子序列!我看了很多文献,报道的启动子序列与要克隆的序列是同一种植物,而我的是不同的植物,我想知道这样能不能克隆出来想要的那个启动子序列呢?还有做表达载体时很多文献都是将提取的带有报告基因的序列转移到其他植物中看其表达活性,要是还是转移到原来的植物中是否也能看其表达活性?哪位高手帮帮忙?
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annwt

木虫 (正式写手)

启动子克隆方法应该很多了,这应该叫同源克隆,是个快捷的方法,
2楼2008-09-21 07:22:19
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

hehe

植物常用的启动子是CaMV病毒的启动子吧。文献中报道的测启动子活性,一般是为了比较启动子表达强度,是否作这类试验,看你的试验目的。现在很多基因组测序了,研究克隆启动子先对简单方便了。单纯的表达基因,个人感觉没大有必要,不过如果是组织特异性或者特殊调控可以分析下。
3楼2008-09-21 19:46:28
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winnie516

新虫 (初入文坛)

回复三楼

我研究的植物还没全基因组测序,而且我所研究的启动子是具有组织特异性表达的。虽然启动子的结构好是比较保守的,但我觉得物种还是有些关系,如果用二楼所说的同源克隆,结果会不会不好?
4楼2008-09-22 08:36:18
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platanus

木虫 (著名写手)

这个有可能扩增不到,应为如果你扩增的是特异表达的启动子的话,那么在另一个植物里的序列不一定在你的目的植物里面也有一样的序列.另外,转报告基因看活性的话转你的目的植物也是可以看活性的,只是一般别人都是转模式植物的,这样写文章就好说一点而已!如果是特异表达的话,你转目的植物就可以表达得更好了!
5楼2008-10-27 22:20:27
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十比

木虫 (著名写手)

我也想克隆一个基因的启动子,即使有全基因组序列,我做了全长,但我不知道启动子应该是转录起始位点上游多少bp呢?  要扩多长才能保证启动子在里面呢?  请高手指点.
6楼2008-10-27 23:29:28
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