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bill1989914银虫 (初入文坛)
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纳米金与蛋白质IgG结合做纳米探针，为何IgG浓度大反而变蓝色。离心团聚。 已有5人参与
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我目前在做纳米金探针，想要将IgG结合在纳米颗粒表面上。 我的AuNP尺寸为15~20nm ，利用UV-vis观察了吸收峰为519~520nm之间。SEM观察尺寸还算不错。 但是在组装纳米探针是出现了很多问题。 1） 首先条件利用K2CO3溶液调节纳米金溶液的pH到9.这一步没有问题 2） 加入不同浓度IgG溶液，1ug/ml ~ 200ug/ml 。 这一步，如果加入的IgG溶液浓度低，则纳米金溶液没有明显变化；如果浓度高，溶液就会变紫。我尝试加1mg/ml的IgG，只加了2ul，溶液立刻变成无色了。 可是，我看别人的步骤里的结果正好相反，是当IgG浓度不足时，在加入10% NaCl 溶液后，IgG量不足的才会发生变色的情况，反而是充足和IgG过量的不变色。 参考百度或者其他人在论坛中的回复 ： http://baike.baidu.com/view/2011997.htm 3．胶体金与标记蛋白用量之比的确定 （1）根据待标记蛋白的要求，将胶体金调好pH之后，分装10管，每管1ml。 （2）将标记蛋白（以IgG为例）以0.005Mol/L pH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5mg/ml～50mg/ml，分别取1ml，加入上列金胶溶液中，混匀。对照管只加1ml稀释液。 （3）5min后，在上述各管中加入0.1ml 10%NaCl溶液，混匀后静置2h，观察结果。 （4）结果观察，对照管（未加蛋白质）和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管，均呈现出由红变蓝的聚沉现象；而加入蛋白量达到或超过最低稳定量的各管仍保持红色不变。以稳定1ml胶体金溶液红色不变的最低蛋白质用量，即为该标记蛋白质的最低用量，在实际工作中，可适当增加10%～20%。 我想请问大家，为什么我的现象确实 ，加入IgG浓度高就立刻变色？ 如果我的纳米金溶液没有问题的话。那么问题就应该处在我的IgG 溶液身上。我目用的是 Goat-anti rabbit IgG , 我也用过 Rabbit IgG。IgG是用pH 7.4 的 1XPBS 磷酸盐缓冲溶液稀释的，难道不能用PBS作为溶液？ 3） 洗涤部分。我利用没有明显变色的组装的溶液（IgG浓度少的），组装后，加入PEG2000 . 一小时后，离心去除上清液。 之后加入1% BSA 的PH=7.4 的PBS 重新混合。结果溶液还是变紫了！ 我尝试了各种办法，比如将pH 改9 ，或者还加入PEG2000. 但是结果虽然有所改善，但还是不理想。颜色上还是有一些变化。利用UV-vis也可看出系数峰值移动了。好的情况在525~526nm。不好的情况在536nm左右，而且，长波长部分的吸收值明显升高。 我想问，洗涤部分的问题出现在哪里？ 这两个部分困扰我好久了，求求大家有经验的帮帮忙~ 跪谢了~~~ |
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bill1989914
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2楼2015-12-02 23:54:57
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bill1989914
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| ？ |
5楼2015-12-12 03:15:53
【答案】应助回帖
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纳米表面的电荷会被pbs buffer中的离子和，导致团聚，你可以尝试在纳米表面先修饰一下biotin PEG, 谷歌一下修饰的过程，有文章秒速的很详细，然后再修饰蛋白到Peg上 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-12-12 03:57:43
7楼2016-03-17 10:08:20
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