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熙利十六

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化问题 已有1人参与

各位虫友,本人有一现象无法解释,请求赐教!本人用蛋白纯化仪纯化蛋白,咪唑洗涤浓度为40mM,洗脱浓度为500mM;红色箭头标记为目的蛋白,HIS标签,大小37KD;绿色箭头标记为杂蛋白,大小约14KD;本人用镍柱纯化也一直有这个杂蛋白,做WB发现杂蛋白可以目的蛋白制备的抗体结合(前面师姐纯化得到的,抗体较纯,我现在是重复她的实验,但是就是一直有那条带,师姐纯化时没有),也可以和his抗体结合。请赐教!谢谢

蛋白纯化问题
11.png
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 熙利十六 at 2015-11-30 19:45:24
谢谢,按我师姐的步骤已经纯化很多次了,每次都有那条带,用的载体是pET-30a表达载体...

换别的实验室的新的pet-30a 试试
5楼2015-12-01 14:57:04
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old_yang

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
仔细查看实验记录,比较你们两人的操作步骤,记录用的溶液,或者加一个空白对照,看看是哪一步引入的。

[ 发自小木虫客户端 ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-11-30 19:09:22
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熙利十六

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by old_yang at 2015-11-30 19:09:22
仔细查看实验记录,比较你们两人的操作步骤,记录用的溶液,或者加一个空白对照,看看是哪一步引入的。

谢谢,按我师姐的步骤已经纯化很多次了,每次都有那条带,用的载体是pET-30a表达载体
3楼2015-11-30 19:45:24
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4楼2015-11-30 19:47:39
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