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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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chenfang20045

金虫 (小有名气)

[交流] 请教各位:双酶切切不开怎么会事?怎么办?

我用kpn1和Hind3双酶切一个质粒,酶切6小时后电泳,总出现一条质粒带,如果能切开,应该是两条带的啊,请问什么原因?如何解决?谢谢!
(因为这个质粒是我构建的的一个质粒,连上了我的一段目的基因,想双酶切验证一下目的基因是否已连上,但总切不开,急!)
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

先用两个酶分别做单切,如果都能切开,说明这两个酶是好使的
再与双切的载体部分比较位置,如果位置有差异,说明你的片段被切掉了,
看不见可能是因为量太少的大原因
如果双切位置与单切位置一样,说明有一种酶没发挥效果,建议重新配制体系
2楼2008-09-18 20:52:36
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

酶是哪家公司的?
9楼2008-09-20 00:12:04
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普通回帖

chenfang20045

金虫 (小有名气)

谢谢!我试一下。
3楼2008-09-18 22:06:51
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chenfang20045

金虫 (小有名气)

谢谢!我试一下。
4楼2008-09-18 22:07:02
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chenfang20045

金虫 (小有名气)

谢谢!我试一下。
5楼2008-09-18 22:07:46
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zhangpengbo822

银虫 (正式写手)

如果跑胶你要的带不能出来,1可能是胶的浓度的问题,2可能量太少
坚持,坚定,坚信
6楼2008-09-19 08:53:39
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chenfang20045

金虫 (小有名气)

酶切后质粒那条带很清楚,就是目的基因那条带看不到,大约750bp。
7楼2008-09-19 22:45:40
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chenfang20045

金虫 (小有名气)

有人知道kpn1和Hind3分别单酶切的反应体系吗?谢谢!
8楼2008-09-19 22:47:59
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chenfang20045

金虫 (小有名气)

上海生工的酶
10楼2008-09-20 09:21:40
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