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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教各位：双酶切切不开怎么会事？怎么办？
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chenfang20045

金虫 (小有名气)

[交流] 请教各位：双酶切切不开怎么会事？怎么办？

我用kpn1和Hind3双酶切一个质粒，酶切6小时后电泳，总出现一条质粒带，如果能切开，应该是两条带的啊，请问什么原因？如何解决？谢谢！
（因为这个质粒是我构建的的一个质粒，连上了我的一段目的基因，想双酶切验证一下目的基因是否已连上，但总切不开，急！）
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1楼 2008-09-18 20:38:37
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
先用两个酶分别做单切，如果都能切开，说明这两个酶是好使的
再与双切的载体部分比较位置，如果位置有差异，说明你的片段被切掉了，
看不见可能是因为量太少的大原因
如果双切位置与单切位置一样，说明有一种酶没发挥效果，建议重新配制体系
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2楼2008-09-18 20:52:36
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
酶是哪家公司的？
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9楼2008-09-20 00:12:04
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chenfang20045

金虫 (小有名气)
谢谢！我试一下。
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3楼2008-09-18 22:06:51
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chenfang20045

金虫 (小有名气)
谢谢！我试一下。
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4楼2008-09-18 22:07:02
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chenfang20045

金虫 (小有名气)
谢谢！我试一下。
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5楼2008-09-18 22:07:46
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zhangpengbo822

银虫 (正式写手)
如果跑胶你要的带不能出来，1可能是胶的浓度的问题，2可能量太少
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坚持，坚定，坚信
6楼2008-09-19 08:53:39
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chenfang20045

金虫 (小有名气)
酶切后质粒那条带很清楚，就是目的基因那条带看不到，大约750bp。
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7楼2008-09-19 22:45:40
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chenfang20045

金虫 (小有名气)
有人知道kpn1和Hind3分别单酶切的反应体系吗？谢谢！
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8楼2008-09-19 22:47:59
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chenfang20045

金虫 (小有名气)
上海生工的酶
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10楼2008-09-20 09:21:40
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