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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教各位：双酶切切不开怎么会事？怎么办？
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
从来没用过生工的酶，它们给提供什么样的buffer也不清楚
给你提供下列体系供参考：
1.NEB
Enzyme Supplied NEBuffer % Activity in NEBuffers 1 2 3 4
Hind III  2            50 100 10 50
Kpn I     1 + BSA  100 75 0 50
建议使用buffer2+BSA
2.Takara
在各种Universal Buffer中的相对活性：
                 L      M    H     K    T(+BSA)
Hind III     (60) 100 ＜20  200   (100)
Kpn I        100  60  ＜20  ＜20  (100)
建议使用buffer M

也就是说如果你用生工的酶，应该选择它们提供的中盐buffer进行酶切
应该就是随HindIII提供的那个buffer
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11楼2008-09-20 11:32:19
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
刚提供的是双切体系，单切体系你就用随酶提供的就行啊
如果没有，看上帖
可选用NEB或Takara的替代，活性也都列出来了
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12楼2008-09-20 11:35:56
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figo.339

木虫 (著名写手)
说明书上有的
你那里没有说明书吗
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13楼2008-09-20 12:08:08
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stanwang626

铜虫 (小有名气)
也可能有碱基突变了
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14楼2008-09-20 19:34:53
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chenfang20045

金虫 (小有名气)
谢谢各位！
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15楼2008-09-22 21:30:53
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
切开不一定能看到。因为小片段太小了。。你做个对照吧。这样可以比对出来
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16楼2008-09-23 10:15:10
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zfbhunting

新虫 (初入文坛)
知道哪个公司的的酶就去公司网站上去找   上海生工是个代理商吧  去生产这个酶的公司网站找
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17楼2008-09-25 11:11:18
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stanwang626

铜虫 (小有名气)
做个质粒对照，看切开了没有
没切开可能是在酶切位点有碱基突变的可能
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18楼2008-09-25 11:15:19
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silviasj

金虫 (著名写手)
考虑下是不是你得基因没有连上。
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19楼2008-09-25 22:19:49
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
建议先做个菌液PCR，再抽提质粒酶切，我通常酶切用TaKaRa的酶，但是我用Tango buffer
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20楼2008-10-02 20:44:12
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