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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

从来没用过生工的酶,它们给提供什么样的buffer也不清楚
给你提供下列体系供参考:
1.NEB
Enzyme Supplied NEBuffer % Activity in NEBuffers 1 2 3 4
Hind III  2            50 100 10 50
Kpn I     1 + BSA  100 75 0 50
建议使用buffer2+BSA
2.Takara
在各种Universal Buffer中的相对活性:
                 L      M    H     K    T(+BSA)
Hind III     (60) 100 <20  200   (100)
Kpn I        100  60  <20  <20  (100)
建议使用buffer M

也就是说如果你用生工的酶,应该选择它们提供的中盐buffer进行酶切
应该就是随HindIII提供的那个buffer
11楼2008-09-20 11:32:19
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

刚提供的是双切体系,单切体系你就用随酶提供的就行啊
如果没有,看上帖
可选用NEB或Takara的替代,活性也都列出来了
12楼2008-09-20 11:35:56
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figo.339

木虫 (著名写手)

说明书上有的
你那里没有说明书吗
13楼2008-09-20 12:08:08
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stanwang626

铜虫 (小有名气)

也可能有碱基突变了
14楼2008-09-20 19:34:53
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chenfang20045

金虫 (小有名气)

谢谢各位!
15楼2008-09-22 21:30:53
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者

切开不一定能看到。因为小片段太小了。。你做个对照吧。这样可以比对出来
16楼2008-09-23 10:15:10
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zfbhunting

新虫 (初入文坛)

知道哪个公司的的酶就去公司网站上去找   上海生工是个代理商吧  去生产这个酶的公司网站找
17楼2008-09-25 11:11:18
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stanwang626

铜虫 (小有名气)

做个质粒对照,看切开了没有
没切开可能是在酶切位点有碱基突变的可能
18楼2008-09-25 11:15:19
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silviasj

金虫 (著名写手)

考虑下是不是你得基因没有连上。
19楼2008-09-25 22:19:49
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zemin_fang

木虫 (正式写手)

建议先做个菌液PCR,再抽提质粒酶切,我通常酶切用TaKaRa的酶,但是我用Tango buffer
20楼2008-10-02 20:44:12
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