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请教各位:双酶切切不开怎么会事?怎么办?
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我用kpn1和Hind3双酶切一个质粒,酶切6小时后电泳,总出现一条质粒带,如果能切开,应该是两条带的啊,请问什么原因?如何解决?谢谢! (因为这个质粒是我构建的的一个质粒,连上了我的一段目的基因,想双酶切验证一下目的基因是否已连上,但总切不开,急!) |
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从来没用过生工的酶,它们给提供什么样的buffer也不清楚 给你提供下列体系供参考: 1.NEB Enzyme Supplied NEBuffer % Activity in NEBuffers 1 2 3 4 Hind III 2 50 100 10 50 Kpn I 1 + BSA 100 75 0 50 建议使用buffer2+BSA 2.Takara 在各种Universal Buffer中的相对活性: L M H K T(+BSA) Hind III (60) 100 <20 200 (100) Kpn I 100 60 <20 <20 (100) 建议使用buffer M 也就是说如果你用生工的酶,应该选择它们提供的中盐buffer进行酶切 应该就是随HindIII提供的那个buffer |
11楼2008-09-20 11:32:19
2楼2008-09-18 20:52:36
3楼2008-09-18 22:06:51
4楼2008-09-18 22:07:02













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