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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 为何WB结果marker处有很亮的带？
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MIMPI

新虫 (初入文坛)

[求助] 为何WB结果marker处有很亮的带？ 已有1人参与

用HIS-tag单抗来鉴定带his标签的表达蛋白，但是WB结果出现多条较淡的带，且Marker处有几条较亮的带。哪位大神可以帮我解释下这是为什么？为什么用his单抗可是特异性还不好？

注：用的一抗二抗都是进口的，没问题。HIS单抗1:10000稀释，二抗1:5000稀释
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1楼 2015-11-30 14:52:33
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zhongli12sk

新虫 (初入文坛)
是不是污染了？！

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2楼2015-11-30 23:07:00
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生科深似海

新虫 (小有名气)
虽说是进口的  但是国内的代理商不靠谱啊 很多抗体到手里都不靠谱了  建议更换抗体

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3楼2015-11-30 23:09:31
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海底刚琴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
MIMPI: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2015-12-02 12:01:23
maker 本身也是用His标签纯化的蛋白制作成的，用His抗体去孵育WB膜现出maker这很正常。
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生活总是有那么多门槛，一口气跨过去就好了。
4楼2015-12-01 20:05:29
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MIMPI

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 海底刚琴 at 2015-12-01 20:05:29
maker 本身也是用His标签纯化的蛋白制作成的，用His抗体去孵育WB膜现出maker这很正常。

原来是这样！非常感谢！

那请问结果特异性不强的原因可能是什么？
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5楼2015-12-02 12:01:01
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海底刚琴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by MIMPI at 2015-12-02 12:01:01
原来是这样！非常感谢！

那请问结果特异性不强的原因可能是什么？...

结果特异性不强是指有杂带出现，背景深，还是指目的条带不显著？前两个是可能是膜没有封闭好、抗体特异性不好、IP的单抗、蛋白降解或修饰，后一个和抗体浓度、孵育时间、蛋白本身的量有关。
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生活总是有那么多门槛，一口气跨过去就好了。
6楼2015-12-09 21:21:32
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海底刚琴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by MIMPI at 2015-12-02 12:01:01
原来是这样！非常感谢！

那请问结果特异性不强的原因可能是什么？...

结果特异性不强是指有杂带出现，背景深，还是指目的条带不显著？前两个是可能是膜没有封闭好、抗体特异性不好、IP的单抗、蛋白降解或修饰，后一个和抗体浓度、孵育时间、蛋白本身的量有关。
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生活总是有那么多门槛，一口气跨过去就好了。
7楼2015-12-09 21:22:12
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