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MIMPI

新虫 (初入文坛)

[求助] 为何WB结果marker处有很亮的带? 已有1人参与

用HIS-tag单抗来鉴定带his标签的表达蛋白,但是WB结果出现多条较淡的带,且Marker处有几条较亮的带。哪位大神可以帮我解释下这是为什么?为什么用his单抗可是特异性还不好?

注:用的一抗二抗都是进口的,没问题。HIS单抗1:10000稀释,二抗1:5000稀释
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zhongli12sk

新虫 (初入文坛)

2楼2015-11-30 23:07:00
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生科深似海

新虫 (小有名气)

虽说是进口的  但是国内的代理商不靠谱啊 很多抗体到手里都不靠谱了  建议更换抗体

发自小木虫Android客户端
3楼2015-11-30 23:09:31
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海底刚琴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
MIMPI: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2015-12-02 12:01:23
maker 本身也是用His标签纯化的蛋白制作成的,用His抗体去孵育WB膜现出maker这很正常。
生活总是有那么多门槛,一口气跨过去就好了。
4楼2015-12-01 20:05:29
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MIMPI

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 海底刚琴 at 2015-12-01 20:05:29
maker 本身也是用His标签纯化的蛋白制作成的,用His抗体去孵育WB膜现出maker这很正常。

原来是这样!非常感谢!

那请问结果特异性不强的原因可能是什么?
5楼2015-12-02 12:01:01
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海底刚琴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by MIMPI at 2015-12-02 12:01:01
原来是这样!非常感谢!

那请问结果特异性不强的原因可能是什么?...

结果特异性不强是指有杂带出现,背景深,还是指目的条带不显著?前两个是可能是膜没有封闭好、抗体特异性不好、IP的单抗、蛋白降解或修饰,后一个和抗体浓度、孵育时间、蛋白本身的量有关。
生活总是有那么多门槛,一口气跨过去就好了。
6楼2015-12-09 21:21:32
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海底刚琴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by MIMPI at 2015-12-02 12:01:01
原来是这样!非常感谢!

那请问结果特异性不强的原因可能是什么?...

结果特异性不强是指有杂带出现,背景深,还是指目的条带不显著?前两个是可能是膜没有封闭好、抗体特异性不好、IP的单抗、蛋白降解或修饰,后一个和抗体浓度、孵育时间、蛋白本身的量有关。
生活总是有那么多门槛,一口气跨过去就好了。
7楼2015-12-09 21:22:12
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