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xiaomao225

新虫 (正式写手)

[求助] 求助PCR大神 已有4人参与

这样的俩个引物能P出来模板吗?为什么

求助PCR大神


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xiaomao225

新虫 (正式写手)

2楼2015-11-30 09:48:23
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jianguochen

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
xiaomao225: 金币+40, ★★★很有帮助 2015-11-30 19:41:58
理论上来说,引物3‘端对错配要求严格,特别是末端的一个一两个碱基错配都可能无法扩增。没看错的话,你引物3’端二十多个碱基不匹配,所以应该是扩不出来的。调过来,不匹配在5‘端倒是没什么。不过楼主这么做的目的是什么呢,如果只是扩增模板的话BC和EF即可。
3楼2015-11-30 10:06:57
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaomao225: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-11-30 19:42:12
同意楼上,楼主刚好与引物设计思路相背,引物3'必须严格配对,5'端可以游离,特别是靠近3'端的几个碱基必须配对,每多一个不配对碱基,扩增效率会呈指数下降,当达到一定阈值就扩不出产物了
没有做不到,只有想不到!
4楼2015-11-30 11:59:51
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个觉得看不懂,没必要吧,目的是干嘛呢?
这样设计理论上不可行吧???
有你真好
5楼2015-11-30 16:34:38
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jackeyun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个是扩不出来的。如果要对你图里的两个部分做突变,需要设计六条引物,两轮pcr

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6楼2015-11-30 18:47:39
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xiaomao225

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jackeyun at 2015-11-30 18:47:39
这个是扩不出来的。如果要对你图里的两个部分做突变,需要设计六条引物,两轮pcr

谢谢

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7楼2015-11-30 19:38:30
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xiaomao225

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jianguochen at 2015-11-30 10:06:57
理论上来说,引物3‘端对错配要求严格,特别是末端的一个一两个碱基错配都可能无法扩增。没看错的话,你引物3’端二十多个碱基不匹配,所以应该是扩不出来的。调过来,不匹配在5‘端倒是没什么。不过楼主这么做的目 ...

恩,我只是用模板(空载体)做模板也P出来了,不知道是怎么回事,我只是想证明下以这样的载体作模板P不出来才对。

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8楼2015-11-30 19:41:30
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