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xiaomao225

新虫 (正式写手)

[求助] 求助PCR大神 已有4人参与

这样的俩个引物能P出来模板吗？为什么

求助PCR大神


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1楼 2015-11-30 09:19:07
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xiaomao225

新虫 (正式写手)
顶

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2楼2015-11-30 09:48:23
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jianguochen

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaomao225: 金币+40, ★★★很有帮助 2015-11-30 19:41:58
理论上来说，引物3‘端对错配要求严格，特别是末端的一个一两个碱基错配都可能无法扩增。没看错的话，你引物3’端二十多个碱基不匹配，所以应该是扩不出来的。调过来，不匹配在5‘端倒是没什么。不过楼主这么做的目的是什么呢，如果只是扩增模板的话BC和EF即可。
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3楼2015-11-30 10:06:57
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaomao225: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-11-30 19:42:12
同意楼上，楼主刚好与引物设计思路相背，引物3'必须严格配对，5'端可以游离，特别是靠近3'端的几个碱基必须配对，每多一个不配对碱基，扩增效率会呈指数下降，当达到一定阈值就扩不出产物了
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没有做不到，只有想不到！
4楼2015-11-30 11:59:51
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个觉得看不懂，没必要吧，目的是干嘛呢？
这样设计理论上不可行吧？？？
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有你真好
5楼2015-11-30 16:34:38
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jackeyun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个是扩不出来的。如果要对你图里的两个部分做突变，需要设计六条引物，两轮pcr

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6楼2015-11-30 18:47:39
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xiaomao225

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jackeyun at 2015-11-30 18:47:39
这个是扩不出来的。如果要对你图里的两个部分做突变，需要设计六条引物，两轮pcr

谢谢

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7楼2015-11-30 19:38:30
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xiaomao225

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jianguochen at 2015-11-30 10:06:57
理论上来说，引物3‘端对错配要求严格，特别是末端的一个一两个碱基错配都可能无法扩增。没看错的话，你引物3’端二十多个碱基不匹配，所以应该是扩不出来的。调过来，不匹配在5‘端倒是没什么。不过楼主这么做的目 ...

恩，我只是用模板（空载体）做模板也P出来了，不知道是怎么回事，我只是想证明下以这样的载体作模板P不出来才对。

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8楼2015-11-30 19:41:30
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