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hc-material

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[求助] 求助蛋白降解啥原因？

用酵母菌表达130kd的蛋白，发酵过程就有部分降解，成了110和130两个蛋白，然后离子交换过程中也有部分降解，若不冻干，还是有部分继续降解。纯化加蛋白酶抑制剂没啥作用，啥原因，怎么解决啊，求大神么指导啊啊

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1楼 2015-11-26 15:26:15

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执着的狼

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hc-material: 回帖置顶 2015-12-17 17:25:15

以下几个方法可以试一下：
一、低温表达，可控制诱导温度在22度到25度，具体的可以摸索一下
二、找一个合适的ph，表达的时候发现ph超过6很容易降解。
三、构建菌株时破坏掉蛋白酶的基因。
如果实在没办法，就试着想办法提高表达量，缩短诱导时间。

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细品悠然茶香，静观世事沧桑

2楼2015-11-26 16:32:38

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hc-material

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 执着的狼 at 2015-11-26 16:32:38
以下几个方法可以试一下：
一、低温表达，可控制诱导温度在22度到25度，具体的可以摸索一下
二、找一个合适的ph，表达的时候发现ph超过6很容易降解。
三、构建菌株时破坏掉蛋白酶的基因。
如果实在没办法 ...

好的，谢谢

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3楼2015-11-27 08:52:51

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