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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大家遇到过这样的pcr问题吗
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maosan520

铜虫 (初入文坛)

[交流] 大家遇到过这样的pcr问题吗

以质粒为模板pcr扩目的基因的cDNA全长，之前用高保真酶primer star扩的好好的，突然间就扩不出来了。引物，模板，酶，buffer,反应条件都试过了，发现，用普通taq酶能扩出来，高保真酶就不行。那位大侠遇到过类似的情况啊，还请指点一下，急啊，都试了三次了，都是这样的结果。
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菜鸟一只
1楼 2008-09-17 11:50:42
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
我用普通的rTaq, ExTaq酶都能扩增出来，换上高保真的Pyrobest Taq总是出不来，都摸索了好久了，还是出不来，现在打算换其他的高保真酶试试，郁闷ing!
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2008-09-17 12:02:27
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yelitao1983

银虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-14 10:00
估计是你的高保真酶出了问题，换新的从新试试
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3楼2008-09-17 15:12:27
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-14 09:59
如果为了保真还能扩出来 可以用LA-TaQ TAkara
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4楼2008-09-17 16:36:22
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
因为高保真酶的效率低
所以聚合时间要弄长一点点
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5楼2008-09-17 19:15:56
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annwt

木虫 (正式写手)
据前辈们讲，没有高保真时，大家用Taq一样，什么表达，功能都可以，有了高保真就必须用他，可是有时是不好扩。
好像不同公司的高保真条件不太一样，可以询问改公司的技术支持，应该注意什么方面。
办法总比困难多!!!祝你尽快成功！！！
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6楼2008-09-18 07:57:15
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