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maosan520

铜虫 (初入文坛)

[交流] 大家遇到过这样的pcr问题吗

以质粒为模板pcr扩目的基因的cDNA全长,之前用高保真酶primer star扩的好好的,突然间就扩不出来了。引物,模板,酶,buffer,反应条件都试过了,发现,用普通taq酶能扩出来,高保真酶就不行。那位大侠遇到过类似的情况啊,还请指点一下,急啊,都试了三次了,都是这样的结果。
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菜鸟一只
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

我用普通的rTaq, ExTaq酶都能扩增出来,换上高保真的Pyrobest Taq总是出不来,都摸索了好久了,还是出不来,现在打算换其他的高保真酶试试,郁闷ing!
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
2楼2008-09-17 12:02:27
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yelitao1983

银虫 (小有名气)

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-14 10:00
估计是你的高保真酶出了问题,换新的从新试试
3楼2008-09-17 15:12:27
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-14 09:59
如果为了保真还能扩出来 可以用LA-TaQ TAkara
4楼2008-09-17 16:36:22
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

因为高保真酶的效率低
所以聚合时间要弄长一点点
5楼2008-09-17 19:15:56
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annwt

木虫 (正式写手)

据前辈们讲,没有高保真时,大家用Taq一样,什么表达,功能都可以,有了高保真就必须用他,可是有时是不好扩。
好像不同公司的高保真条件不太一样,可以询问改公司的技术支持,应该注意什么方面。
办法总比困难多!!!祝你尽快成功!!!
6楼2008-09-18 07:57:15
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