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xiaoping1986

银虫 (著名写手)

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[求助] 粪便基因组提取方法已有3人参与

使用耶拿核酸提取系统及其配套的innu PREP DNA Kit-IPC16试剂盒提取粪便基因组，在1%琼脂糖胶上有明显的marker条带，但是基因组条带却没有（附件中有提取基因组的跑胶照片）？提取时粪便是新鲜粪便，加液氮研磨后取20mg,按照试剂盒说明书提取，想知道是什么问题没有提取到基因组？自己推测原因是：1、试剂盒不适合；2、粪便处理方法不对，粪便用量不够？想求助下有没有人用过这个试剂盒，在提取方法上有什么需要改进的？有没有可以推荐使用的专门提取粪便基因组的试剂盒？请不吝赐教，谢谢！

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1楼 2015-11-23 15:29:44

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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

粪便首先需要预处理：粪便标本加人装有2mL无菌PBS缓冲液(0.05mol/L，pH 7.4)试管中充分振荡摇匀5～10min后3000转/分（rpm）离心5min，收集上清液，此步骤重复2次,最终收集上清液每份1ml置于1.5ml 离心管中。然后上清液12000rpm离心l0min，弃上清后，沉淀物在lmL双蒸水(ddH20)中悬置，混和后12000rpm离心5min，此步骤重复2次，收集沉淀。接下来的步骤就是用酚氯仿的抽提的方法。不过这种化学法花费时间长效果也不一定好，而且苯酚氯仿什么的有毒，用试剂盒操作就安全简便多了，时间短，差不多半小时就可以了。常用的有凯杰QIAGEN，天根TIANGEN，百代BIODAI等。