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xiaoping1986

银虫 (著名写手)

[求助] 粪便基因组提取方法 已有3人参与

使用耶拿核酸提取系统及其配套的innu PREP DNA Kit-IPC16试剂盒提取粪便基因组,在1%琼脂糖胶上有明显的marker条带,但是基因组条带却没有(附件中有提取基因组的跑胶照片)?提取时粪便是新鲜粪便,加液氮研磨后取20mg,按照试剂盒说明书提取,想知道是什么问题没有提取到基因组?自己推测原因是:1、试剂盒不适合;2、粪便处理方法不对,粪便用量不够?想求助下有没有人用过这个试剂盒,在提取方法上有什么需要改进的?有没有可以推荐使用的专门提取粪便基因组的试剂盒?请不吝赐教,谢谢!

粪便基因组提取方法
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biolinker

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们抽提粪便用的是 QIAamp DNA Stool Mini Kit 粪便DNA基因组提取试剂盒,这个效果挺不错的。
2楼2015-11-24 11:14:39
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xiaoping1986

银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biolinker at 2015-11-24 11:14:39
我们抽提粪便用的是 QIAamp DNA Stool Mini Kit 粪便DNA基因组提取试剂盒,这个效果挺不错的。

这个试剂盒价格是不是要2000多,最近天根来推销他们的产品,请问有没有用过这个牌子,效果怎么样?
3楼2015-11-24 14:24:22
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cxkhhh

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

粪便提取,有用过biog,提取的纯度还不错,后续荧光定量PCR也可以直接做
4楼2018-11-09 09:42:55
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摩天轮711

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoping1986 at 2015-11-24 14:24:22
这个试剂盒价格是不是要2000多,最近天根来推销他们的产品,请问有没有用过这个牌子,效果怎么样?...

天根做试剂盒时间比较久,牌子比较老,但是做实验的话时间还是花费比较久的,我们做实验用的是biog试剂盒,时间短,,粪便预处理后,可在15分钟内完成操作,快速便捷。
5楼2018-12-05 14:05:35
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

粪便首先需要预处理:粪便标本加人装有2mL无菌PBS缓冲液(0.05mol/L,pH 7.4)试管中充分振荡摇匀5~10min后3000转/分(rpm)离心5min,收集上清液,此步骤重复2次,最终收集上清液每份1ml置于1.5ml 离心管中。然后上清液12000rpm离心l0min,弃上清后,沉淀物在lmL双蒸水(ddH20)中悬置,混和后12000rpm离心5min,此步骤重复2次,收集沉淀。接下来的步骤就是用酚氯仿的抽提的方法。不过这种化学法花费时间长效果也不一定好,而且苯酚氯仿什么的有毒,用试剂盒操作就安全 简便多了,时间短,差不多半小时就可以了。常用的有凯杰QIAGEN,天根TIANGEN,百代BIODAI等。
6楼2019-03-13 08:59:07
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