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xiaoping1986银虫 (著名写手)
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[求助]
粪便基因组提取方法已有3人参与
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使用耶拿核酸提取系统及其配套的innu PREP DNA Kit-IPC16试剂盒提取粪便基因组，在1%琼脂糖胶上有明显的marker条带，但是基因组条带却没有（附件中有提取基因组的跑胶照片）？提取时粪便是新鲜粪便，加液氮研磨后取20mg,按照试剂盒说明书提取，想知道是什么问题没有提取到基因组？自己推测原因是：1、试剂盒不适合；2、粪便处理方法不对，粪便用量不够？想求助下有没有人用过这个试剂盒，在提取方法上有什么需要改进的？有没有可以推荐使用的专门提取粪便基因组的试剂盒？请不吝赐教，谢谢！ Cache_237d955ee243daea..jpg |
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2楼2015-11-24 11:14:39
xiaoping1986
银虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 专业: 食品科学基础
3楼2015-11-24 14:24:22
4楼2018-11-09 09:42:55
5楼2018-12-05 14:05:35
【答案】应助回帖
| 粪便首先需要预处理：粪便标本加人装有2mL无菌PBS缓冲液(0.05mol/L，pH 7.4)试管中充分振荡摇匀5～10min后3000转/分（rpm）离心5min，收集上清液，此步骤重复2次,最终收集上清液每份1ml置于1.5ml 离心管中。然后上清液12000rpm离心l0min，弃上清后，沉淀物在lmL双蒸水(ddH20)中悬置，混和后12000rpm离心5min，此步骤重复2次，收集沉淀。接下来的步骤就是用酚氯仿的抽提的方法。不过这种化学法花费时间长效果也不一定好，而且苯酚氯仿什么的有毒，用试剂盒操作就安全 简便多了，时间短，差不多半小时就可以了。常用的有凯杰QIAGEN，天根TIANGEN，百代BIODAI等。 |
6楼2019-03-13 08:59:07