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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA抽提
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haoyunxia

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA抽提 已有2人参与

最近一直在做RNA抽提实验，测得的OD260/OD280基本上都在2.27左右，用这个RNA 逆转录的cDNA做荧光相对定量PCR，GAPDH的CT值都在28左右，目的基因的CT值倒在15-20之间，是不是说RNA中GAPDH对应的mRNA降解了啊？
隔壁实验室同学  跟我用的一样的RNA抽提试剂盒，耗材也一样，但是他们抽提出来的RNA的OD260/OD280在2.2以下，GAPDH的CT值在20以下。是我抽提RNA操作的问题吗？好久了，最近的实验都卡在这了。
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1楼 2015-11-23 13:44:42
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misang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RNA纯度确实不行，你抽提的时候减少一下细胞量试试

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5楼2015-11-25 13:03:07
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天机哥哥

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
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2楼2015-11-23 15:01:02
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haoyunxia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天机哥哥 at 2015-11-23 15:01:02
RNA的OD260/OD280应该在1.9~2.0之间，大于2.0说明其RNA出现了降解，你也可以跑下胶验证下

我后来又用消化离心收集的细胞  和血管组织研磨同时提取RNA  细胞的OD260/OD280在2.26 血管组织的在2.0   这都是同时做的 怎么差别这么大呢？
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3楼2015-11-23 18:29:07
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酒家何处

新虫 (小有名气)
od比值不靠谱就重新做rna提取。。不同样品肯定有区别。加些RI，可能有内源性rna酶。

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4楼2015-11-23 23:03:05
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