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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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haoyunxia

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA抽提 已有2人参与

最近一直在做RNA抽提实验,测得的OD260/OD280基本上都在2.27左右,用这个RNA 逆转录的cDNA做荧光相对定量PCR,GAPDH的CT值都在28左右,目的基因的CT值倒在15-20之间,是不是说RNA中GAPDH对应的mRNA降解了啊?
隔壁实验室同学  跟我用的一样的RNA抽提试剂盒,耗材也一样,但是他们抽提出来的RNA的OD260/OD280在2.2以下,GAPDH的CT值在20以下。是我抽提RNA操作的问题吗?好久了,最近的实验都卡在这了。
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天机哥哥

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
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2楼2015-11-23 15:01:02
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haoyunxia

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 天机哥哥 at 2015-11-23 15:01:02
RNA的OD260/OD280应该在1.9~2.0之间,大于2.0说明其RNA出现了降解,你也可以跑下胶验证下

我后来又用消化离心收集的细胞  和血管组织研磨同时提取RNA  细胞的OD260/OD280在2.26 血管组织的在2.0   这都是同时做的 怎么差别这么大呢?
3楼2015-11-23 18:29:07
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酒家何处

新虫 (小有名气)

od比值不靠谱就重新做rna提取。。不同样品肯定有区别。加些RI,可能有内源性rna酶。

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-23 23:03:05
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misang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
RNA纯度确实不行,你抽提的时候减少一下细胞量试试

发自小木虫Android客户端
5楼2015-11-25 13:03:07
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

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6楼2016-04-25 17:14:47
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