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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

[求助] 菌液测序结果全是非单克隆，求助分析 已有2人参与

最近同时做了两个植物内生真菌基因库的TA克隆（简称M和N吧），用的18t载，蓝白斑筛选后，后送公司测序。
     第一天M送了十几个样，除了部分公司说没有培养成功，无法提取质粒外，其他的基本都测序成功，且测出来的目的基因序列没有问题。
     第二天N送了15个样，公司说5个培养失败，2个测序失败，7个非单克隆，1个测序成功，但是这个测序成功的序列我去载体后的基因序列压根不是我想要的。
     然后我对7个非单克隆的序列尝试去载体，有几个序列能找到插入点前端序列，但是找不到插入点后端序列；还有的插入点前后端序列都找不到；还有的前后端序列都能找到，但插入的序列不是目的序列。
     同一批的处理，出现这种结果，不是很理解，我在送样前每个都随机筛选了七八个样，跑了菌液pcr，看了条带，都没有问题。本人小白，也是刚刚接触克隆测序实验，还请大家多多指教。

以下为几张测序显示非单克隆的峰图：

菌液测序结果全是非单克隆，求助分析
截图00.jpg


菌液测序结果全是非单克隆，求助分析-1
截图01.jpg


菌液测序结果全是非单克隆，求助分析-2
截图02.jpg
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1楼 2015-11-22 12:47:17
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
没有回答

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2楼2015-11-22 20:31:24
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
好吧

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3楼2015-11-22 21:52:08
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51mimi

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分析两次有什么差别，会有帮助。

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4楼2015-11-23 09:14:26
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
"然后我对7个非单克隆的序列尝试去载体，有几个序列能找到插入点前端序列，但是找不到插入点后端序列；还有的插入点前后端序列都找不到；还有的前后端序列都能找到，但插入的序列不是目的序列"这段话我没太看懂，是不是就是没有找到插入目的序列的意思？

菌p的引物不能用pcr特异性引物，会有假阳性，用质粒的测序引物，比如M13来菌p试试，如果拿不到目的条带，就说明你没将目的序列连入质粒。
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5楼2015-11-23 09:34:35
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lvshilu at 2015-11-23 09:34:35
"然后我对7个非单克隆的序列尝试去载体，有几个序列能找到插入点前端序列，但是找不到插入点后端序列；还有的插入点前后端序列都找不到；还有的前后端序列都能找到，但插入的序列不是目的序列"这段话我没 ...

嗯，我跑pcr用的就是M13引物对跑的pcr，我说的意思是测出来的序列里面也没有载体插入点序列，不知道怎么测出来的序列

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6楼2015-11-23 22:45:37
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璎珞流苏169

银虫 (初入文坛)
请问楼主解决了这个非单克隆问题吗
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7楼2016-03-07 09:21:18
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橡胶手套

新虫 (初入文坛)
我也遇到了非单克隆，请问你怎么解决的呢？
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8楼2017-05-05 10:34:54
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