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divingfish新虫 (小有名气)
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[求助]
重组突变caspase遇问题求解答
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各位大神好，本人小硕，目前打算自己clone wild-type和mutant caspase-2 into an expression plasmid containing the small fluorophore. 同样的试验步骤成功了wild-type但是mutant一直不成功。细菌纯化后的产物经过cleavage后跑agarose gel电泳的结果中一直有vector中的tBid条带，而成功的wt没有这条带，只有caspase的条带。 大致试验流程如下： PCR复制 inserted DNA --> PCR产物以及vector cleavage --> Ligation --> transfected bacteria --> 纯化产物再切开验证 做了几次重复实验，也尝试改变过实验部分条件，也用过agarose电泳纯化，都没有inserted DNA的踪影。求问大家觉得问题可能出现在什么地方？谢谢！ |
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