| 查看: 348 | 回复: 0 | ||
divingfish新虫 (小有名气)
|
[求助]
重组突变caspase遇问题求解答
|
|
各位大神好，本人小硕，目前打算自己clone wild-type和mutant caspase-2 into an expression plasmid containing the small fluorophore. 同样的试验步骤成功了wild-type但是mutant一直不成功。细菌纯化后的产物经过cleavage后跑agarose gel电泳的结果中一直有vector中的tBid条带，而成功的wt没有这条带，只有caspase的条带。 大致试验流程如下： PCR复制 inserted DNA --> PCR产物以及vector cleavage --> Ligation --> transfected bacteria --> 纯化产物再切开验证 做了几次重复实验，也尝试改变过实验部分条件，也用过agarose电泳纯化，都没有inserted DNA的踪影。求问大家觉得问题可能出现在什么地方？谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复