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断剑祭红颜

新虫 (初入文坛)

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虫号: 4080117

[交流] 求助各位大神帮我分析一下为啥表达的产物始终没有酶活。。没有金币求助帖都发不起

本人刚进实验室，拿到了4株实验室前人构建的工程菌,都是BL21的。
然后按照之前人留下的实验方法做，得到的粗酶液始终没有酶活。4株菌4种酶，都没有酶活。
考虑过可能是产生了大量包涵体，降低了温度和IPTG浓度到15℃和0.05mm，得到的产物依然没有酶活。
考虑过可能是超声波破碎的问题，各种功率各种时间破碎，还是没有酶活。上清液和破碎的沉淀都没有酶活。
也想过可能是质粒丢失，但是这4株都是新构建的菌，不肯能全部都丢失吧。而且发酵液中反而有微弱的酶活。
限于水平问题，我只能想到这些原因了，恳请小木虫的大神们帮忙分析一下为什么始终没有酶活啊。
我已经在这卡住好几星期了。。