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木虫 (正式写手)

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专业: 免疫生物学

[交流] 用transwell做细胞迁移实验，求教已有4人参与

我的实验步骤大致是这样的：
1. Hela细胞与药物在培养瓶中共同孵育24小时
2. 移除原培养基，用无血清培养基洗涤几次；用胰酶消化并用无血清培养基收集细胞
3. 向transwell（8微米孔径）下室加600微升含10%FBS的培养基，上室加入200微升细胞悬液；孵育24小时
4. 移除上、下室的液体
5. 下室加入600微升4%多聚甲醛固定细胞半小时
6. 移除多聚甲醛，用棉签擦除未穿过膜的细胞
7. 下室加入600微升0.1%结晶紫染色10分钟
8. 用PBS洗涤小室
9. 在显微镜下观察细胞并计数。

由于我做的是细胞迁移实验而不是侵袭实验，所以没加基质胶。请大家帮我看看，我的实验步骤有没有错误或需要改进的地方？
另外我还有不懂的问题想请教。transwell小室中的那个膜是半透膜吗？如果不是的话，8微米孔径对FBS来说是很大的，上下室FBS浓度不同，下室FBS不久会很快扩散到上室而达到浓度平衡了吗？这样的话，上室细胞还怎么迁移到下室？

我是做transwell实验的新手，请大家多多指点。

发自小木虫Android客户端

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