| 查看: 1996 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
etb1木虫 (正式写手)
|
[交流]
用transwell做细胞迁移实验，求教 已有4人参与
|
||
|
我的实验步骤大致是这样的： 1. Hela细胞与药物在培养瓶中共同孵育24小时 2. 移除原培养基，用无血清培养基洗涤几次；用胰酶消化并用无血清培养基收集细胞 3. 向transwell（8微米孔径）下室加600微升含10%FBS的培养基，上室加入200微升细胞悬液；孵育24小时 4. 移除上、下室的液体 5. 下室加入600微升4%多聚甲醛固定细胞半小时 6. 移除多聚甲醛，用棉签擦除未穿过膜的细胞 7. 下室加入600微升0.1%结晶紫染色10分钟 8. 用PBS洗涤小室 9. 在显微镜下观察细胞并计数。 由于我做的是细胞迁移实验而不是侵袭实验，所以没加基质胶。请大家帮我看看，我的实验步骤有没有错误或需要改进的地方？ 另外我还有不懂的问题想请教。transwell小室中的那个膜是半透膜吗？如果不是的话，8微米孔径对FBS来说是很大的，上下室FBS浓度不同，下室FBS不久会很快扩散到上室而达到浓度平衡了吗？这样的话，上室细胞还怎么迁移到下室？ 我是做transwell实验的新手，请大家多多指点。 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
上海工程技术大学【激光智能制造】课题组招收硕士
已经有6人回复
-
带资进组求博导收留
已经有11人回复
-
自荐读博
已经有5人回复
-
求个博导看看
已经有16人回复
-
上海工程技术大学张培磊教授团队招收博士生
已经有4人回复
-
求助院士们，这个如何合成呀
已经有4人回复
-
临港实验室与上科大联培博士招生1名
已经有9人回复
-
写了一篇“相变储能技术在冷库中应用”的论文，论文内容以实验为主，投什么期刊合适？
已经有6人回复
-
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章
已经有11人回复
-
中科院杭州医学所招收博士生一名（生物分析化学、药物递送）
已经有3人回复
5楼2016-01-23 20:39:48
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
我也是24孔板，可是一般不是只能看到小室上室的细胞吗？所以显微镜调节是可以看到24底部的细胞的？喔本来还在想是不是要先把小室拿出来才能看呢，谢谢 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2016-01-24 22:00:30