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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 做蛋白质native电泳为何样品聚集在分离胶顶部不往下跑
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ruqing

新虫 (初入文坛)

[交流] 做蛋白质native电泳为何样品聚集在分离胶顶部不往下跑 已有4人参与

最近在做native电泳，为何我的样品全都聚集在分离胶顶部，不往下走，而mark跑得还挺好呢。

做蛋白质native电泳为何样品聚集在分离胶顶部不往下跑
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1楼 2015-11-19 20:26:30
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51mimi

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
marker能跑下去并且跑开，说明胶没问题，还是样品的问题，看看样品的属性，大小，以及胶浓度是否合适？

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2楼2015-11-20 08:42:12
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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)
native电泳进行蛋白质的分离纯化时：
1.首先sample能够跑出条带，说明胶没问题，样品楼主应该好好看看。
2.如果sample先跑的动，后来就不动了，很可能就是缓冲液的问题。
3.有气泡但是sample就是不动，那一定就是缓冲液问题。检查缓冲液的时候，从配胶缓冲液开始查起。
4.有些新同学在配胶的时候可能就是吧浓缩胶缓冲液和分离胶缓冲液弄混了。
5.电泳缓冲液最好是用前现配。
祝你成功！
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我好累，承受这个年纪不该有的帅！
3楼2015-11-20 09:17:35
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做的是原核表达么？电压是多少？样品是否做过处理？电泳条件是什么？上样量是多少？是否有糖基化的情况？
根据你的描述和图来看，只能确定是样品问题，一般来说，样品跑不下来很有可能是蛋白样品过于粘稠，建议稀释后再上样；另如果目的蛋白可溶建议离心，取上清进行跑胶，如果不可溶，用8M尿素，6M盐酸胍进行溶解后，离心，取上清跑胶。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-11-20 09:22:00
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lz0308

木虫 (正式写手)
louzhuhaoyun
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我是一只小小小小乌龟，爬啊爬啊爬啊爬、、、、、
5楼2015-11-21 10:35:49
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ruqing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-11-20 09:17:35
native电泳进行蛋白质的分离纯化时：
1.首先sample能够跑出条带，说明胶没问题，样品楼主应该好好看看。
2.如果sample先跑的动，后来就不动了，很可能就是缓冲液的问题。
3.有气泡但是sample就是不动，那一定就是 ...

您第二点说的缓冲液，是指什么缓冲液呢，上样缓冲液嘛？
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6楼2015-12-07 14:48:18
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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ruqing at 2015-12-07 14:48:18
您第二点说的缓冲液，是指什么缓冲液呢，上样缓冲液嘛？...

电极缓冲液
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我好累，承受这个年纪不该有的帅！
7楼2015-12-07 16:17:45
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