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zhumenjun

木虫 (正式写手)

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[交流] 求助：荧光分析法遇到的一些问题

小弟初涉荧光分析，在实验的设计及仪器的使用都存在不少疑惑，希望有高人帮我指点一下，也希望和各位虫友一起分享。
1.实验用水：我用的是一般蒸馏水，但文献查阅一般用的是二次蒸馏水，请问是不是一定需要用二次蒸馏水？对荧光测量是否有影响？
2.溶剂选择：我实验中用到是多环芳烃（英蒽，菲，芘），由于室温下溶解度较低，我先用丙酮溶解配制成高浓度标准液，再将溶解至蒸馏水中，丙酮含量为1%，请问选择丙酮作为溶剂合适吗，还是选择其他有机溶剂？水中丙酮含量是否合适，越低越好吗？
3.标准液的保存：配制好的标准液，再用丙酮稀释成较低浓度的溶液，做标线是每次都不一样，是否每次都要重新配制，还是保存可用？
4.荧光波长：做了几次预实验，每次激发和发射波长位置都有所改变，请问是不是仪器的问题，我用的是PE-LS55荧光分光光度计？还是先做好一次标线后，固定好激发或发射波长，而后就不用扫描波长?
5.荧光强度：很多文献上提到是相对荧光强度，是不是用测得的样品荧光强度减去空白的荧光强度所得值？定量分析时用到的是什么荧光强度？
不好意思，一下子提了很多问题，因为需要马上解决，如有对实验设计有看法的，望提出宝贵意见，谢谢。

[ Last edited by zhumenjun on 2008-9-16 at 15:47 ]

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1楼 2008-09-16 10:46:55

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jack2070

木虫 (著名写手)

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★ ★ ★
wingcat(金币+2,VIP+0):SEM操作规程.doc
wingcat(金币+0,VIP+0):谢谢。刚才弄错了。
zhumenjun(金币+1,VIP+0):谢谢解答

回答问题2：采用丙酮作溶剂非常适合，很多文献都是这样的。不过不建议直接用水稀释。好像许多文献上是这样的：取定量的丙酮母液在容量瓶里面（应该小于1mL的），放在电热板上（四五十摄氏度），缓慢挥干丙酮，再加水。
回答问题4：你仪器是不是挺老了，我们这边仪器也有这种问题（很老了）。理论上来说是不应该的，你找新的高级仪器试试便知。