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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 求助：荧光分析法遇到的一些问题
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zhumenjun

木虫 (正式写手)

[交流] 求助：荧光分析法遇到的一些问题

小弟初涉荧光分析，在实验的设计及仪器的使用都存在不少疑惑，希望有高人帮我指点一下，也希望和各位虫友一起分享。
1.实验用水：我用的是一般蒸馏水，但文献查阅一般用的是二次蒸馏水，请问是不是一定需要用二次蒸馏水？对荧光测量是否有影响？
2.溶剂选择：我实验中用到是多环芳烃（英蒽，菲，芘），由于室温下溶解度较低，我先用丙酮溶解配制成高浓度标准液，再将溶解至蒸馏水中，丙酮含量为1%，请问选择丙酮作为溶剂合适吗，还是选择其他有机溶剂？水中丙酮含量是否合适，越低越好吗？
3.标准液的保存：配制好的标准液，再用丙酮稀释成较低浓度的溶液，做标线是每次都不一样，是否每次都要重新配制，还是保存可用？
4.荧光波长：做了几次预实验，每次激发和发射波长位置都有所改变，请问是不是仪器的问题，我用的是PE-LS55荧光分光光度计？还是先做好一次标线后，固定好激发或发射波长，而后就不用扫描波长?
5.荧光强度：很多文献上提到是相对荧光强度，是不是用测得的样品荧光强度减去空白的荧光强度所得值？定量分析时用到的是什么荧光强度？
不好意思，一下子提了很多问题，因为需要马上解决，如有对实验设计有看法的，望提出宝贵意见，谢谢。

[ Last edited by zhumenjun on 2008-9-16 at 15:47 ]
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1楼 2008-09-16 10:46:55
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jack2070

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
wingcat(金币+2,VIP+0):SEM操作规程.doc
wingcat(金币+0,VIP+0):谢谢。刚才弄错了。
zhumenjun(金币+1,VIP+0):谢谢解答
回答问题2：采用丙酮作溶剂非常适合，很多文献都是这样的。不过不建议直接用水稀释。好像许多文献上是这样的：取定量的丙酮母液在容量瓶里面（应该小于1mL的），放在电热板上（四五十摄氏度），缓慢挥干丙酮，再加水。
回答问题4：你仪器是不是挺老了，我们这边仪器也有这种问题（很老了）。理论上来说是不应该的，你找新的高级仪器试试便知。
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平生之志，唯求温饱！
2楼2008-09-16 13:51:08
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jiangpingyue

铜虫 (小有名气)
★ ★
wingcat(金币+1,VIP+0):谢谢。
zhumenjun(金币+1,VIP+0):谢谢解答
问题一：如果做检出限的话，会发现用二次蒸馏水比用一次蒸馏水的空白小很多
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www.360yiqi.com
3楼2008-09-18 11:39:16
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jiangpingyue

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
wingcat(金币+2,VIP+0):谢谢。
zhumenjun(金币+1,VIP+0):谢谢解答
问题四：波长改变5nm范围内都算正常
问题五：一般仪器测到的就是相对 强度
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www.360yiqi.com
4楼2008-09-18 11:40:34
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王小猫

金虫 (正式写手)

猫の妖
★ ★ ★
wingcat(金币+2,VIP+0):谢谢。
zhumenjun(金币+1,VIP+0):谢谢解答
回答问题1   二次水里的杂质较少  对待测液中的离子影响较小
回答问题3   我个人建议现用现配  标准液也会受环境的影响哦
回答问题4   有的时候溶剂水对溶质的荧光会产生猝灭效应
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***九命猫妖***
5楼2008-09-18 12:52:31
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fengtingti

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
wingcat(金币+2,VIP+0):谢谢。
zhumenjun(金币+1,VIP+0):谢谢解答
问题一：实验最好用二次水，一次水可能对实验有影响，有的实验影响挺大的．
问题二：也可以选择其他溶剂，比如：乙醇，丙酮含量对实验有影响，你可以改变丙酮的含量具体研究一下对实验有怎样的影响．
问题三：具体问题具体对待，物质不同，可以保存的时间也不同．
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6楼2008-09-18 17:13:03
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zhumenjun

木虫 (正式写手)
谢谢大家的回复，现在使用的0.5%的丙酮做标准曲线，有文献上提到0.5%一下的甲醇对吸附无影响，只不过出现了新的问题，在对样品进行过膜处理时（0.45um微孔滤膜），发现损失有50%以上，请问有什么测量多环芳烃时用什么的滤膜比较合适？谢谢
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7楼2008-09-23 11:28:23
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