| 查看: 1780 | 回复: 14 | |||
anqier0717新虫 (初入文坛)
|
[求助]
用ＧＥ蛋白纯化仪分离不同分子量的胶原蛋白，求助！！！ 已有3人参与
|
||
|
大家好，本人新手第一次做蛋白，很多问题都不懂，请大神们不吝赐教。 试验目的：用ＧＥ的蛋白纯化仪纯化一批胶原蛋白样品，最终得到纯的相同分子量的蛋白。 样品描述：该胶原蛋白样品分子量估计有１０ｋｄ－１８０ｋｄ（有可能更大或更小，实验室的ｍａｒｋｅｒ就这么大的，我只做了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ验证了一下）。 我想问大家的问题是： １、我之前用超滤膜过滤，但是效果不好，无论是用０.１μｍ的膜过滤还是１５万Ｄ的膜过滤，总有一段９５KD-72KD的蛋白（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ验证），还有１８０ｋｄ－１３０ｋｄ（６％胶跑出来的）、４３－３４ｋｄ（１２％的胶跑出来的）、１７－１０ｋｄ（１２％和１５％的胶都跑出来了）的条带，但是都不纯。所以才选用蛋白纯化仪纯化，希望能得到纯的相同分子量的蛋白。请问我这个思路是正确的吗？ ２、要用蛋白纯化仪纯化要选什么柱子，是否需要买脱盐柱？（不确定这些蛋白分子量是否很接近，目前还不知道蛋白ＰＩ）。 ３、求具体的实验步骤，或者告诉我一些可以学习的教材。 谢谢大家了，目前想到的问题就这些，希望大家一起交流探讨！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
278求调剂
已经有3人回复
-
289求调剂
已经有8人回复
-
303求调剂
已经有6人回复
-
求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343
已经有5人回复
-
271求调剂
已经有3人回复
-
318求调剂
已经有3人回复
-
07化学280分求调剂
已经有7人回复
-
化学调剂
已经有6人回复
-
318求调剂
已经有8人回复
-
0703化学求调剂
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 国家生化工程技术研究中心（北京）
已经有0人回复
nadia926499
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5413.4
- 红花: 4
- 帖子: 211
- 在线: 100.6小时
- 虫号: 1741716
- 注册: 2012-04-07
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
14楼2015-11-23 00:49:41
2楼2015-11-18 22:18:40
anqier0717
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 175
- 散金: 5
- 帖子: 50
- 在线: 43.8小时
- 虫号: 1550332
- 注册: 2011-12-24
- 专业: 流行病学方法与卫生统计
3楼2015-11-18 22:37:53
a86052
金虫 (正式写手)
- 应助: 151 (高中生)
- 金币: 1648.5
- 散金: 110
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 737.5小时
- 虫号: 864561
- 注册: 2009-10-07
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2015-11-19 09:17:31
wucuixia 
捐助贵宾 (著名写手)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 2919.3
- 散金: 674
- 红花: 3
- 帖子: 1469
- 在线: 462.9小时
- 虫号: 3136155
- 注册: 2014-04-14
- 性别: GG
- 专业: 环境污染化学
5楼2015-11-19 10:08:45
6楼2015-11-19 10:38:49
【答案】应助回帖
★ ★
anqier0717: 金币+2, ★有帮助 2015-11-20 11:50:19
anqier0717: 金币+2, ★有帮助 2015-11-20 11:50:19
|
首先你要确定自己蛋白多大，跑过的电泳看看纯度如何，如果杂蛋白跟你目的蛋白差不多，估计分子筛分不开，可以考虑离子交换…… 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2015-11-19 12:45:20
anqier0717
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 175
- 散金: 5
- 帖子: 50
- 在线: 43.8小时
- 虫号: 1550332
- 注册: 2011-12-24
- 专业: 流行病学方法与卫生统计
8楼2015-11-20 11:46:53
anqier0717
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 175
- 散金: 5
- 帖子: 50
- 在线: 43.8小时
- 虫号: 1550332
- 注册: 2011-12-24
- 专业: 流行病学方法与卫生统计
9楼2015-11-20 11:48:03
anqier0717
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 175
- 散金: 5
- 帖子: 50
- 在线: 43.8小时
- 虫号: 1550332
- 注册: 2011-12-24
- 专业: 流行病学方法与卫生统计
10楼2015-11-20 11:49:46
5