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anqier0717

新虫 (初入文坛)

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专业: 流行病学方法与卫生统计

[求助] 用ＧＥ蛋白纯化仪分离不同分子量的胶原蛋白，求助！！！已有3人参与

　　大家好，本人新手第一次做蛋白，很多问题都不懂，请大神们不吝赐教。
　　试验目的：用ＧＥ的蛋白纯化仪纯化一批胶原蛋白样品，最终得到纯的相同分子量的蛋白。
　　样品描述：该胶原蛋白样品分子量估计有１０ｋｄ－１８０ｋｄ（有可能更大或更小，实验室的ｍａｒｋｅｒ就这么大的，我只做了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ验证了一下）。
　　
　　我想问大家的问题是：
　　１、我之前用超滤膜过滤，但是效果不好，无论是用０.１μｍ的膜过滤还是１５万Ｄ的膜过滤，总有一段９５KD-72KD的蛋白（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ验证），还有１８０ｋｄ－１３０ｋｄ（６％胶跑出来的）、４３－３４ｋｄ（１２％的胶跑出来的）、１７－１０ｋｄ（１２％和１５％的胶都跑出来了）的条带，但是都不纯。所以才选用蛋白纯化仪纯化，希望能得到纯的相同分子量的蛋白。请问我这个思路是正确的吗？

　　２、要用蛋白纯化仪纯化要选什么柱子，是否需要买脱盐柱？（不确定这些蛋白分子量是否很接近，目前还不知道蛋白ＰＩ）。
　　３、求具体的实验步骤，或者告诉我一些可以学习的教材。

谢谢大家了，目前想到的问题就这些，希望大家一起交流探讨！！！
　　　　

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