| 查看: 5585 | 回复: 5 | ||
[求助]
我的蛋白western曝光没有任何条带，一片空白，怎么回事？
|
|
请教各位做蛋白western的高手们，本人最近做拟南芥叶片的蛋白western，做了好几次了，曝光后片子上什么都没有。转膜后染色能看到蛋白条带，之后5%的封闭液（2g奶粉+0.5g BSA至50mlTBST）封闭1h， 一抗1:100 4℃孵育过夜，二抗1:5000孵育1h，之后化学发光3min，压片5min和20min，过夜都没有条带。我之前只成功过一次，是用野生型植株做的，发光后暗室内能明显看到膜结合抗体的部位在发光，后来的都看不到了，是我提的蛋白量太少了吗？ 大家帮我看一看染色后的膜。 我提拟南芥叶片蛋白是用了50mg叶片，之前成功的那次用了200mg，提拟南芥叶片蛋白做western用量多少合适呢？ 跪求各位大神解答，感激不尽！！！！！  2015.11.6蛋白样品.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 |
已经有5人回复
-
275求调剂
已经有13人回复
-
0856，材料与化工321分求调剂
已经有8人回复
-
085701环境工程，267求调剂
已经有12人回复
-
320分，材料与化工专业，求调剂
已经有7人回复
-
085701环境工程求调剂
已经有8人回复
-
295材料工程专硕求调剂
已经有5人回复
-
265求调剂
已经有8人回复
-
322求调剂
已经有4人回复
-
085602 307分 求调剂
已经有6人回复
2楼2015-11-17 10:25:56
3楼2015-11-17 16:28:35
4楼2015-11-17 18:40:07
wuwenmei
新虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1472.1
- 散金: 8
- 红花: 1
- 帖子: 280
- 在线: 54.9小时
- 虫号: 3114800
- 注册: 2014-04-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
5楼2015-11-17 20:37:13
6楼2015-12-09 14:02:51
