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我的蛋白western曝光没有任何条带，一片空白，怎么回事？
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请教各位做蛋白western的高手们，本人最近做拟南芥叶片的蛋白western，做了好几次了，曝光后片子上什么都没有。转膜后染色能看到蛋白条带，之后5%的封闭液（2g奶粉+0.5g BSA至50mlTBST）封闭1h， 一抗1:100 4℃孵育过夜，二抗1:5000孵育1h，之后化学发光3min，压片5min和20min，过夜都没有条带。我之前只成功过一次，是用野生型植株做的，发光后暗室内能明显看到膜结合抗体的部位在发光，后来的都看不到了，是我提的蛋白量太少了吗？ 大家帮我看一看染色后的膜。 我提拟南芥叶片蛋白是用了50mg叶片，之前成功的那次用了200mg，提拟南芥叶片蛋白做western用量多少合适呢？ 跪求各位大神解答，感激不尽！！！！！  2015.11.6蛋白样品.JPG |
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